AT9283

AT9283 porta a un chiaro fenotipo poliploide inibendo l'attività della Aurora B chinasi nelle cellule HCT116 con una IC50 di 30 nM. Inoltre, questo composto produce anche una potente inibizione sulla formazione di colonie di HCT116. [1]

In topi portatori di xenotrapianto di carcinoma del colon umano HCT116, il trattamento con AT9283 (15 mg/kg e 20 mg/kg) per 16 giorni si traduce in una significativa inibizione della crescita tumorale del 67% e 76%, rispettivamente. Inoltre, questo composto mostra anche una emivita significativamente più lunga nei tumori (2,5 ore) rispetto al plasma (0,5 ore) e una modesta biodisponibilità orale nei topi (Fp.o. = 24%). [1]

• Saggi di Aurora A e Aurora B Kinasi

  I saggi per Aurora A e B vengono eseguiti in formato DELFIA. L'enzima Aurora A viene incubato con AT9283 e 3 μM di substrato cross-tide (biotina-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG) in 10 mM MOPS, pH 7, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glicerolo, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl₂, 0,01% β-mercaptoetanolo, 15 μM ATP e 2,5% DMSO. L'enzima Aurora B viene incubato con questo composto, 3 μM del substrato sopra menzionato in 25 mM Tris, pH 8,5, 5 mM MgCl₂, 0,1 mg/mL BSA, 0,025% Tween-20, 1 mM DTT, 15 μM ATP e 2,5% DMSO. Le reazioni vengono lasciate procedere per 60 minuti e 45-90 minuti per Aurora A e Aurora B, rispettivamente, prima di essere interrotte con EDTA. Le miscele di reazione vengono quindi trasferite su una piastra rivestita di neutravidina e il peptide fosforilato viene quantificato mediante un anticorpo fosfo-specifico e un anticorpo secondario marcato con europio utilizzando la fluorescenza risolta nel tempo (eccitazione, 337 nm; emissione, 620 nm). I valori di IC50 per i composti di controllo sono 92 nM (saggio Aurora A) e 17 nM (saggio Aurora B).

• Linee cellulari

  HCT 116 cells

• Concentrazioni

  1 nM - 10 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  HCT 116 cells are cultured in DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I. Black 96-well flat-bottomed (clear) tissue culture treated plates are seeded in 200 μL of medium and incubated for approximately 16 hours at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO₂ in air. Cells are treated with test compound at nine different concentrations (spanning 1 nM to 10 μM, plus DMSO vehicle control) and then incubated for 72 hours. Polyploidy morphological observations of the cells are then noted. The concentration of AT9283 required to produce a distinct polyploid phenotype is reported. Cells are seeded at a concentration of 75−100 cells/mL relevant culture media onto 6- or 24-well tissue culture plates and allowed to recover for 16 hours. This compound (11 concentrations spanning 0.1 nM to 10 μM) or vehicle control (DMSO) is added to duplicate wells to give a final DMSO concentration of 0.1%. Following compound addition, colonies are allowed to grow between 10 and 14 days for optimum discrete colony counting. Colonies are fixed in 2 mL of Carnoys fixative (25% acetic acid, 75% MeOH) and stained in 2 mL of 0.4% w/v crystal violet. The numbers of colonies in each well is counted. IC50 values are calculated by sigmoidal dose-response (variable slope) IC50 curves using Prism Graphpad software.

• Modelli animali

  HCT116 cells are injected s.c. Into the hind flank of male BALB/c mice.

• Dosaggi

  15 mg/kg and 20 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.p.