740 Y-P (PDGFR 740Y-P)

Il peptide PDGFR 740Y-P stimola una risposta mitogena nelle cellule muscolari. La capacità del peptide 740Y-P di stimolare la mitogenesi è altamente specifica e non una caratteristica generale dei peptidi leganti il dominio SH2 permeabili alle cellule[2].

740Y-P è efficace quanto un fattore di crescita (FGF2) nel promuovere la sopravvivenza delle cellule neuronali tramite la cascata di sopravvivenza PI 3-chinasi-Akt stabilita. La stimolazione della sopravvivenza delle cellule neuronali da parte del peptide PDGFR740Y-P è dose-dipendente e non richiede insulina[1].

Il 740 Y-P diminuisce il livello di ROS nei tessuti ippocampali trattati con Aβ(25-32) e aumenta l'estensione della fosforilazione di AKT e PI3K in un modello di ratto con malattia di Alzheimer.

• Linee cellulari

  NIH 3T3 cells

• Concentrazioni

  50 μg/ml

• Tempo di incubazione

  2 h

• Metodo

  NIH 3T3 cells (2×10⁶) are incubated in suspension at 37°C in Ca2+ and Mn2+ free HBSS, 10% FCS containing either 50 μg/ml of 740Y-P peptide or an equal volume of PBS as a control. After 2h cells are centrifuged, washed and trypsinised to degrade non-internalised peptide. Cells are then resuspended in lysis buffer (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 10% Glycerol, 2% NP40, 0.25% deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM Vanadate, Protease inhibitors "complete" cocktail from Boehringer-Mannheim) for 1 h at 4°C. Lysates are clarified by centrifugation at 1.4×10⁴g for 5 min and the supernatants are incubated for 1h with streptavidin-agarose beads. Beads are subsequently washed three times in lysis buffer and finally boiled in SDS sample buffer and resolved by SDS-PAGE on a 12% gel, transferred to nitrocellulose and immunoblotted with the p85 monoclonal antibody.