3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride

3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) provoca un aumento significativo nell'accumulo di cellule nella fase G0/G1 (58,5%) con una concomitante diminuzione del numero di cellule nella fase S (35,2%) e nelle fasi G2/M (6,3%) del ciclo cellulare delle cellule di leucemia mieloide acuta umana OCI-AML3. 3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) induce l'apoptosi nelle cellule OCI-AML3 (~50%) e HL-60 (~50%), e una riduzione di oltre il 90% nella crescita delle colonie a 48 ore. 3-Deazaneplanocin A riduce i livelli di EZH2 e inibisce la trimetilazione della lisina 27 sull'istone H3 nelle cellule HL-60 e OCI-AML3 e nelle cellule AML primarie. Il trattamento con 3-Deazaneplanocin A induce p16, p21, p27 e FBXO32 mentre riduce i livelli di ciclina E e HOXA9. 500 nM di 3-Deazaneplanocin A induce la differenziazione delle cellule HL-60 a cellule CD11b⁺ di quasi 3 volte a 48 h. [2] 3-Deazaneplanocin A ha un'eccellente attività contro diversi tipi virali. 3-Deazaneplanocin A è attivo contro la stomatite vescicolare nelle cellule L929, la parainfluenza 3 in H.Ep-2, i virus del vaiolo e della febbre gialla nelle cellule vero con IC50 rispettivamente di 0,2, 3,6, 2,1 e 2,9 μg/mL. [3] 3-Deazaneplanocin A mostra un effetto leishmanostatico forte e uniforme sui ceppi americani di Leishmania (L mexicana e L brasiliensis) nello studio con ID50 media di 96 ng/mL, ma non mostra alcuna inibizione contro i diversi ceppi di T. cruzi e T. rangeli testati con concentrazioni fino a 10 μg/mL. Ad una dose di 200 ng/mL, 3-Deazaneplanocin A inibisce l'incorporazione di S-adenosil-L-3H-metionina e 3-timidina da parte dei promastigoti dopo quattro giorni. Ad una dose di 100 ng/mL, 3-Deazaneplanocin A elimina circa il 56% di L mexicana e L brasiliensis dai macrofagi umani infetti. [4]

3-Deazaneplanocin A mostra attività antileucemica in vivo. 3-Deazaneplanocin A alle dosi di 8 mg/kg mostra attività antivirale in vivo contro il virus del vaiolo vaccino in un saggio di vaiolo della coda di topo con una mediana di 0,0 poxftail (84% di protezione). [3] 3-Deazaneplanocin A alle dosi che vanno da 0,5 a 1,5 mg/kg/giorno, ha significativamente ridotto lo sviluppo dell'infezione leishmanica cutanea prodotta in topi BALB/c consanguinei mediante inoculazione di L. b. guyanensis. [4] 3-Deazaneplanocin A induce una produzione massicciamente aumentata di interferone-α in topi infettati dal virus Ebola. 3-Deazaneplanocin A (iniezione sottocutanea di 2 mg/kg post-infezione) previene la morte in topi infettati con 1000 pfu (30 000 LD50) di EBO-Z adattato al topo. Il trattamento con 3-Deazaneplanocin A al giorno 1 riduce i titoli virali sierici medi al giorno 2 di 100 volte e al giorno 3 di 100 000 volte, rispetto ai controlli con placebo, e si traduce in un livello sierico medio di IFN-α di 1420 pg/mL al giorno 2 e 1830 pg/mL al giorno 3. [5]

• Saggio di attività dell'S-adenosilomocisteina idrolasi

  La miscela di reazione utilizzata per il saggio di AdoHcyase contiene, in un volume finale di 0,5 mL, 50 mM di fosfato di potassio (pH 7,6), 5 mM di ditiotreitolo, 1 mM di EDTA, 10% di glicerolo e l'enzima. L-[8- ^14C]AdoHcy è utilizzato come substrato e sono incluse 5 unità di adenosina deaminasi intestinale di vitello. La reazione viene interrotta con l'aggiunta di 100 μL di acido formico 5 M, e la miscela di reazione viene quindi versata su una colonna (0,8×2,5 cm) di SP-Sephadex C-25, precedentemente equilibrata in acido formico 0,1 M. Ogni provetta viene risciacquata con 0,5 mL di acido formico 0,1 M. La [¹⁴C]Inosina formata viene eluita dalla colonna con 3,5 mL di acido formico 0,1 M in una fiala per scintillazione. La radioattività viene determinata dopo l'aggiunta di 10 mL di liquido di scintillazione. La quantità di enzima utilizzata è di circa 105 pU, o 75 ng dell'enzima purificato. Un'unità è la quantità di enzima necessaria per formare 1 pmol di prodotto in 1 min a 37 ℃.

• Linee cellulari

  Human acute myeloid leukemia HL-60

• Concentrazioni

  ~1 μM

• Tempo di incubazione

  2 days

• Metodo

  Cells are treated with the indicated concentrations of 3-Deazaneplanocin A for 48 hours. After the designated treatments, cells are harvested and washed twice with PBS, and approximately 500 cells are plated in complete Methocult and cultured for 7 to 10 days at 37 ℃ in a 5% CO₂ environment. Cells are dyed with crystal violet, and relative colony density is determined by solubilizing the crystal violet dye in 10% acetic acid followed by measurement of absorbance at 450 nm.

• Modelli animali

  Human acute myeloid leukemia xenografts HL-60

• Dosaggi

  1 mg/kg

• Somministrazione

  initiated on day 7 and administered twice per week (Tuesday-Thursday) intraperitoneally for 2 weeks