2-NBDG

1.1 Preparazione della soluzione madre
Sciogliere 1 mg di 2-NBDG in 2,92 mL di DDH2O per ottenere 1 mM di questo composto.
Nota: Si raccomanda di conservare la soluzione madre a -20 ℃ o -80 ℃ al riparo dalla luce ed evitare cicli ripetitivi di congelamento-scongelamento.
1.2 Preparazione della soluzione di lavoro di 2-NBDG.
Diluire la soluzione madre in terreno di coltura cellulare privo di siero o PBS per ottenere 10-200 μM di questa soluzione di lavoro chimica.
Nota: Si prega di regolare la concentrazione della soluzione di lavoro di questo reagente in base alla situazione attuale.
Colorazione cellulare
2.1 Per le cellule in sospensione: Centrifugare a 1.000 g a 4℃ per 3-5 minuti e quindi scartare il surnatante. Lavare due volte con PBS, 5 minuti ogni volta.
Per le cellule aderenti: Scartare il terreno di coltura cellulare e aggiungere tripsina per dissociare le cellule e formare una sospensione unicellulare. Centrifugare a 1000 g a 4℃ per 3-5 minuti e quindi scartare il surnatante. Lavare due volte con PBS, 5 minuti ogni volta.
2.2 Aggiungere 1 mL di questa soluzione di lavoro del composto e quindi incubare a temperatura ambiente per 5-60 minuti.
2.3 Centrifugare a 400 g a 4℃ per 3-4 minuti e quindi scartare il surnatante.
2.4 Lavare due volte con PBS, 5 minuti ogni volta.
2.5 Risospendere le cellule con terreno di coltura cellulare privo di siero o PBS. Se si testa la vitalità, registrare la densità ottica (D.O.) a 540/570 nm. La vitalità cellulare è stata calcolata come rapporto di controllo e tracciata rispetto alla concentrazione logaritmica del farmaco per calcolare l'IC50.

L'intensità di fluorescenza di 2-NBDG dopo 30 minuti di applicazione topica è stata 6 volte e 4 volte superiore in OSCC e OED, rispettivamente, rispetto alla mucosa normale. L'analisi della curva ROC ha mostrato una sensibilità dell'83% e una specificità del 73% per la rilevazione della neoplasia rispetto ai benigni (normali e infiammazioni). Un più rapido decadimento temporale della fluorescenza nella neoplasia ha indicato un maggiore assorbimento e tasso metabolico del glucosio rispetto alla mucosa normale. La somministrazione mucosale di questo composto mediante applicazione topica alla superficie orale in vivo è fattibile e delinea la neoplasia dalla mucosa normale, fornendo un'imaging molecolare non invasiva in vivo del metabolismo del glucosio disregolato.[2]

• Linee cellulari

  Primary cortical astrocytes

• Concentrazioni

  25 μM to 200 μM

• Tempo di incubazione

  1 h

• Metodo

  Nine culture plates of astrocytes are used for each uptake experiment. After medium is removed and plates are rinsed in wash buffer, cells are incubated at 37 °C in buffer containing 25–200 μM 2-NBDG. After 1 h, buffers are replaced by fresh incubation buffer with 2 mM glucose and incubation is continued for 5 min. The cells are washed twice with prechilled phosphate-buffered saline and are incubated at room temperature in 0.1 mL cell lysis buffer for 10 min.

• Modelli animali

  4-week old male Golden Syrian Hamsters

• Dosaggi

  1 mg/ml (1 ml)

• Somministrazione

  Oral gavage