(-)-Dizocilpine (MK 801) Maleate

Studi neurofisiologici in vitro, utilizzando una preparazione di fettine corticali di ratto, dimostrano un'azione antagonista potente, selettiva e non competitiva della dizocilpina sulle risposte depolarizzanti a N-Me-D-Asp ma non al kainato o al quisqualato. Le potenze di SKF 10047 e degli enantiomeri della dizocilpina come antagonisti di N-Me-D-Asp correlano strettamente (r = 0,99) con le loro potenze come inibitori del legame di [3H] dizocilpina. Questo suggerisce che i siti di legame della dizocilpina sono associati ai recettori N-Me-D-Asp e fornisce una spiegazione per il meccanismo d'azione della dizocilpina come anticonvulsivante. [1]

Tutti i ratti di controllo presentano gravi deficit neurologici permanenti dopo una lesione ischemica del midollo spinale (ISCI), mentre i ratti trattati con dizocilpina hanno un esito neurologico statisticamente (P < 0,05) migliore e un buon recupero. L'istopatologia rivela una grave necrosi neuronale nella sostanza grigia lombare dei ratti di controllo, mentre i ratti trattati con dizocilpina mostrano un lieve danno. Questi risultati dimostrano che una singola dose di dizocilpina somministrata prima dell'ISCI fornisce una significativa neuroprotezione. [3]

• Saggi di legame in vitro

  Per i saggi di legame in vitro, le cortecce cerebrali di ratti Sprague-Dawley maschi (200-300 g) vengono omogeneizzate in 9 volumi di saccarosio ghiacciato mediante nove colpi con un omogeneizzatore in teflon/vetro a 500 rpm. L'omogenato viene centrifugato per 10 min a 1000 x g, e il supernatante viene ricentrifugato a 10.000 x g per 20 min a 4 ℃. Il pellet viene sospeso in tampone di saggio e incubato per 20 min prima della centrifugazione finale a 10.000 x g per 20 min a 4 ℃. Il pellet viene risospeso in tampone di saggio (70 ml per grammo di tessuto originale). Il legame di [3H] dizocilpina viene misurato incubando 750 ul di aliquote duplicate di questa sospensione di membrana grezza (=0,75 mg di proteine) con 100 ul di tampone contenente il dislocante o di solo tampone (legame totale), 100 ul di 50 nM [3H] dizocilpina e 50 ul di tampone per 60 min a 23 ℃. Il legame non specifico è definito da dizocilpina non marcata. L'incubazione viene terminata mediante filtrazione rapida attraverso filtri Whatman GF/B, che vengono lavati immediatamente con due porzioni da 5 ml di tampone di saggio ghiacciato in un raccoglitore di cellule Brandel M 24-R. Il tempo richiesto per la procedura completa di filtrazione e lavaggio è inferiore a 10 secondi. La radioattività sui filtri viene determinata mediante conteggio a scintillazione liquida in fiale standard con 10 ml di Hydrofluor con un'efficienza di conteggio del 41%.

• Linee cellulari

  mixed neuronal/glial cell cultures

• Concentrazioni

  10 μM

• Tempo di incubazione

  30 minutes

• Metodo

  Primary mixed neuronal/glial cultures are prepared from fetal rat brains. Mature cultures are exposed to dissolved dizocilpine (10 μM), and NMDA (0 or 3 μM) at 37 ℃ for 30 minutes. Apoptosis is assessed using terminal-deoxy-nucleotidyl end-nick labeling oligonucleosomal DNA fragmentation enzyme-linked immunosorbent assay, and caspases-3 and -9 activation assays.

• Modelli animali

  ischemic spinal cord injury medel

• Dosaggi

  1 mg/kg

• Somministrazione

  IV