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Y-27632 Dihydrochloride ROCK Inibitore

N. Cat.S1049

Y-27632 2HCl è un inibitore selettivo di ROCK1 e ROCK2 con un Ki di 140 nM e 300nM in un saggio senza cellule, che mostra una selettività >200 volte superiore rispetto ad altre chinasi, tra cui PKC, protein chinasi dipendente da cAMP, MLCK e PAK.
Y-27632 Dihydrochloride ROCK Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 320.26

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.89%
99.89

Prodotti spesso usati con Y-27632 Dihydrochloride

SB202190

This compound and SB202190, along with other small molecule inhibitors, generate inducible mesenchymal stromal/stem cells (MSCs)-like cells (iMSCs) from human primary dermal fibroblasts.

SB431542

This compound and SB431542 combination reverses the mesenchymal actin cytoskeleton stress fibers induced by TGF-β1 in TGF-β1 knockout mice cells (mTEC-KO).

CHIR-99021 (Laduviglusib)

It and CHIR99021 collectively reduce the expression of adipogenic genes in both wild-type (WT) and PKP2mut cardiac myocytes (CMs).

MG132

This compound reduces P-IκBα polyubiquitination caused by TNFα with MG132 pre-treatment in MYLA cells.

Z-VAD-FMK

It and Z-VAD-FMK block membrane blebbing and nucleus condensation induced by H2O2 in PC12 cells.

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
Salivary gland stem cells Function Assay 10 µM 7 d Reduces SGSC senescence 25804560
HT22 Cytotoxic Assay 10 µM 13 h Protects against glutamate-induced neuronal death 22810835
Swiss3T3 Colony-forming Assay 10 µM 13 d Increases prostate cell colony-forming activity 21464902
TSGH 8301 Migration Assay 20 µM 1 h Increases cell migration 19896475
Cynomolgus monkey embryonic stem cells Cytotoxic Assay 20 µM 24 h Promotes cyES cell survival 18940855
PC 12 Function Assay 10 μM 24 h Attenuates catecholamine biosynthesis 16219424
C2C12 Function Assay 10 μM 6 h Prevents the serine phosphorylation of IRS-1 induced by insulin and/or TNF-α 16267124
Pancreatic acinar cells Function Assay 10 μM 70 min Potentiates CCK-stimulated pancreatic enzyme secretion 12745080
Rat hepatic stellate cells Function Assay 30 μM 48 h Diminishes the phosphorylation of Erk2, and decreases new DNA synthesis 10845663
LNCaP Growth Inhibition Assay 25 μM 17 h Does not inhibit cell growth 10720471
PC3 Growth Inhibition Assay 25 μM 17 h Does not inhibit cell growth 10720471
PC3 Migration Assay 25 μM 1 h Inhibits the BMFB-CM and the EGF-stimulated migration 10720471
PC3 Function Assay 25 μM 1 h Induces morphological changes 10720471
Rat Vascular Smooth Muscle Cells Function Assay 10 μM 2 h Inhibits angiotensin II-induced hypertrophy 10642317
Stellate Cell Function Assay 25 μM 15 min Inhibits formation of F-actin stress fibers and phosphorylation of myosin light chain 10600496
Neonatal rat ventricular myocytes Function Assay 10 μM 48 h Inhibits ET-1-induced increases in protein synthesis, cell size and myofibrillar organization 10386613
LS174T Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Moderately inhibits cell growth 10021386
HCT116 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
HCT15 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
SW620 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-2 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-1 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
NIH3T3 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-4 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-1 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Ras-4 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
Ras-2 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
mNET1-e Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
mNET1-d Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
Dbl-e Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Moderately inhibits cell growth 10021386
Dbl-d Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
NIH3T3 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Mesothelial cells from rat mesentery Invasive Assay 30 μM 20 h Blocks invasive activity 9930872
CCL39 Function Assay 30 μM 30 min Completely abolishes activation of Na-H exchanger NHE1 by integrins 9693382
HeLa Function Assay 10 μM 30 min Inhibits the formation of stress fibers and the assembly of vinculin-containing focal adhesions 9668072
N1E-115 Function Assay 10 μM 2 h DMSO Inhibits the assembly of microtubules and intermediate filaments to form extended processes 9647654
Swiss 3T3 cells Function Assay 10 μM 2 h DMSO Inhibits the assembly of microtubules and intermediate filaments to form extended processes 9647654
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 320.26 Formula

C14H21N3O.2HCl

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 129830-38-2 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles CC(C1CCC(CC1)C(=O)NC2=CC=NC=C2)N.Cl.Cl

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 64 mg/mL (199.83 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : 64 mg/mL

Ethanol : 4 mg/mL

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
ROCK1 (p160ROCK)
(Cell-free assay)
140 nM(Ki)
ROCK2
(Cell-free assay)
300 nM(Ki)
In vitro

Y-27632 2HCl inibisce ROCK-II mostrando poca attività contro PKC, la proteina chinasi cAMP-dipendente e la miosina chinasi a catena leggera (MLCK) con Ki rispettivamente di 26 μM, 25 μM e > 250 μM, così come la PKA attivata da un altro membro della GTPasi della famiglia Rho, Cdc42. Questo composto inibisce la contrazione del muscolo liscio indotta da vari agonisti tra cui fenilefrina, istamina, acetilcolina, serotonina, endotelina e trombossano con una IC50 di 0,3-1 μM, inibendo selettivamente la sensibilizzazione al Ca2+. Sopprime la formazione di fibre di stress mediata da Rho e p160ROCK nelle cellule coltivate.

Questo trattamento chimico blocca sia l'attivazione dell'actomiosina mediata da Rho sia l'attività invasiva stimolata da LPA delle cellule MM1 in modo dose-dipendente.

Questo trattamento con il composto non è solo sufficiente per avviare la formazione di processi assonali esuberanti, ma facilita anche la maturazione assonale durante le primissime fasi dell'assonogenesi, pur risparmiando in gran parte l'allungamento assonale.

Nelle cellule staminali embrionali umane (hES), questo trattamento chimico a 10 μM diminuisce marcatamente l'apoptosi indotta dalla dissociazione anche in coltura in sospensione priva di siero (SFEB), aumenta l'efficienza di clonazione (da ~1% a ~27%), facilita il subcloning dopo il trasferimento genico e consente alle cellule hES coltivate in SFEB di sopravvivere e differenziarsi in progenitori corticali e telencefalici basali Bf1+.

Saggio chinasico
Reazioni di fosforilazione
La p160ROCK è espressa nelle cellule COS come proteine a lunghezza intera marcate e immunoprecipitate mediante l'uso di anticorpi anti-tag. La p160ROCK (30 ng) viene incubata con 40 μM [γ-32P]ATP (3,3 Ci/mmol) e con 3 μg di istone (HF2A), caseina defosforilata o MBP in presenza di varie concentrazioni di questo composto a 30 °C in un volume totale di 31 μL. Un'aliquota di 7 μL viene prelevata a 0, 5, 10 e 20 minuti, miscelata con un volume uguale di tampone di campionamento 2 × Laemmli e applicata a SDS-PAGE. Il gel viene colorato con blu di Coomassie, essiccato e sottoposto ad analisi tramite un Bioimage Analyzer BAS2000. Si ottiene la concentrazione di questa sostanza chimica necessaria per inibire l'attività della p160ROCK del 50% (valore IC50). Il valore Ki viene calcolato secondo l'equazione, Ki = IC50/(1 + S/Km), dove S e Km rappresentano le concentrazioni e il valore Km per l'ATP.
In vivo

La somministrazione orale di Y-27632 2HCl a 30 mg/kg diminuisce significativamente la pressione sanguigna in modo dose-dipendente in ratti ipertesi spontanei, ratti ipertesi renali, così come ratti ipertesi con acetato di desossicorticosterone (DOCA)-sale.

Quando questo composto viene somministrato continuamente ad una velocità di 0,55 μL all'ora tramite pompe impiantate per 11 giorni, l'invasione delle cellule tumorali (cellule MM1 che esprimono Val14-RhoA nei ratti) viene significativamente ritardata.

Inibendo ROCK, questo trattamento chimico attenua l'angiogenesi indotta dall'ipossia e il rimodellamento vascolare nella circolazione polmonare. Il pretrattamento con questo composto ha un effetto protettivo contro la formazione di tumori in topi albini con carcinoma ascitico di Ehrlich.

Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17529971/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15961717/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10779382/
  • [7] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24905316/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western Blot p-LIMK1(Thr508) p-LIMK2(Thr505) p-Cofilin(Ser3) CDK2 KRT7 ROCK2 E-cadherin p-MLC2(Ser19)
S1049-WB1
24704720
Transwell migration assay cell migration inhibition
S1049-histogram1
27694793
Immunofluorescence Neurotoxicity Assay E-cadherin beta-catenin Phalloidin
S1049-IF1
21362567
Growth inhibition assay cell proliferation
S1049-histogram2
24523903
ELISA caspase-9
S1049-ELISA1
30320378

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
Is there any data about the Amax (maximum attraction luminosity) and extinction coefficient of it?

Risposta:
The wavelength used to test its HPLC is 260nm, while the extinction coefficient is unknown.

Domanda 2:
Could it be used in cell culture? Do you have any reference for this application?

Risposta:
Yes. It can be used in cell culture certainly. Here is the reference website: http://molpharm.aspetjournals.org/content/57/5/976.full.