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Ripasudil hydrochloride dihydrate ROCK Inibitore

N. Cat.S7995

Ripasudil hydrochloride dihydrate è un potente inibitore di ROCK con IC50 di 51 nM e 19 nM per ROCK1 e ROCK2, rispettivamente, utilizzato per il trattamento del glaucoma e dell'ipertensione oculare.
Ripasudil hydrochloride dihydrate ROCK Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 395.88

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: S799501 Water]79 mg/mL]false]DMSO]26 mg/mL]false]Ethanol]5 mg/mL]false Purezza: 99.22%
99.22

Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 395.88 Formula

C15H18FN3O2S.Cl H.2 H2 O

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 887375-67-9 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi K-115 hydrochloride dihydrate Smiles CC1CNCCCN1S(=O)(=O)C2=CC=CC3=CN=CC(=C32)F.O.O.Cl

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

Water : 79 mg/mL

DMSO : 26 mg/mL (65.67 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 5 mg/mL

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
ROCK2
(Cell-free assay)
19 nM
ROCK1
(Cell-free assay)
51 nM
In vitro

Nelle cellule del trabecolato (TM) di scimmia, Ripasudil induce la retrazione e l'arrotondamento dei corpi cellulari, nonché la disgregazione dei fasci di actina. Nelle cellule endoteliali del canale di Schlemm (SCE), Ripasudil diminuisce significativamente la resistenza elettrica transendoteliale (TEER), aumenta il flusso transendoteliale di FITC-destrano e altera la localizzazione cellulare dell'espressione di ZO-1.

Saggio chinasico
Saggio di inibizione della chinasi
ROCK 1 (0,75 ng/μL) e ROCK 2 (0,5 ng/μL) vengono incubati con varie concentrazioni di K-115, Y-27632 o HA-1077 a 25 °C per 90 min in tampone Tris-HCl 50 mmol/L (pH 7,5) contenente 100 mmol/L KCl, 10 mmol/L MgCl2, 0,1 mmol/L EGTA, 30 μmol/L di peptide substrato di Long S6 Kinase e 1 μmol/L di ATP in un volume totale di 40 μL. PKACα, PKC e CaMKIIα vengono anche incubati con varie concentrazioni di K-115, Y-27632 o HA-1077. PKACα (0,0625 ng/μL) viene incubato a 25 °C per 30 min in tampone Tris-HCl 40 mmol/L (pH 7,5) contenente 20 mmol/L MgCl2, 1 mg/mL di BSA, 5 μmol/L di peptide substrato di Kemptide e 1 μmol/L di ATP in un volume totale di 40 μL. PKC (0,025 ng/μL) viene incubato a 25 °C per 80 min in tampone Tris-HCl 20 mmol/L (pH 7,5) contenente 20 mmol/L MgCl2, 0,4 mmol/L CaCl2, 0,1 mg/mL di BSA, 0,25 mmol/L di EGTA, 25 ng/mL di fosfatidilserina, 2,5 ng/mL di diacilglicerolo, 0,0075% di Triton-X-100, 25 μmol/L di DTT, 10 μmol/L di peptide substrato di Neurogranin (28–43) e 1 μmol/L di ATP in un volume totale di 40 μL. CaMKIIα (0,025 ng/μL) viene incubato a 25 °C per 90 min in tampone Tris-HCl 50 mmol/L (pH 7,5) contenente 10 mmol/L MgCl2, 2 mmol/L CaCl2, 0,04 mg/mL di BSA, 16 μg/mL di calmodulina purificata da testicolo bovino, 500 μmol/L di DTT, 50 μmol/L di Autocamitide 2 e 1 μmol/L di ATP in un volume totale di 40 μL. Dopo l'incubazione, vengono aggiunti 40 μL di soluzione Kinase-Glo Luminescent Kinase Assay e lasciati a 25 °C per 10 min, e le Unità di Luce Relativa (RLU) vengono misurate utilizzando un luminometro. La RLU senza composto di prova è impostata al 100% (valore di controllo), e quella senza enzima e composto è impostata allo 0% (valore normale). Il tasso di reazione (% del controllo) viene quindi calcolato dalla RLU con l'aggiunta di ciascuna concentrazione dei composti di prova, e le concentrazioni inibitorie al 50% (IC50) vengono determinate mediante analisi di regressione logistica utilizzando SAS.
In vivo

Nei conigli albini e nelle scimmie, l'instillazione topica di Ripasudil riduce significativamente la pressione intraoculare (PIO) con una riduzione massima della PIO di 8,55 mmHg e 4,36 mmHg rispettivamente allo 0,5 % e allo 0,4 %.

Ripasudil (1 mg/kg al giorno, p.o.) esercita un effetto neuroprotettivo sulle cellule gangliari retiniche (RGC) dopo schiacciamento del nervo ottico (NC) sopprimendo lo stress ossidativo attraverso vie che coinvolgono la famiglia Nox in un modello murino.

Riferimenti

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT04621136 Completed
Retinopathy of Prematurity
Kyushu University
 November 1 2020 Phase 1|Phase 2