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PP2 (AGL 1879) Src Inibitore

N. Cat.: S7008

PP2 (AG 1879, AGL 1879), un inibitore della chinasi della famiglia Src, inibisce potentemente Lck/Fyn con una IC50 di 4 nM/5 nM in saggi acellulari, ~100 volte meno potente per EGFR, inattivo per ZAP-70, JAK2 e PKA.
PP2 (AGL 1879) Src Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 301.77

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.49%
99.49

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
A549 Growth inhibition assay Growth inhibition of human A549 cells, IC50 = 0.01 μM. 28814374
T-cells Function assay Inhibition of adhesion kinase in human T cells, IC50 = 0.6 μM. 18077363
T-cells Function assay Inhibition of tyrosine phosphorylation in human T cells, IC50 = 0.6 μM. 18077363
SH-SY5Y Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human SH-SY5Y cells assessed as cell viability after 72 hrs by XTT assay, IC50 = 6.1 μM. 21856155
Saos2 Cytotoxicity assay 48 hrs Cytotoxicity against human Saos2 cells after 48 hrs by MTT assay, IC50 = 8.07 μM. 23932070
SaOS2 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human SaOS2 cells assessed as cellular viability, IC50 = 8.1 μM. 17929792
A431 Function assay Inhibitory effect on phospho-Src/nonphospho after EGF (100 uM) stimulation of A431 cells (21), IC50 = 17 μM. 15109642
MEG01 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human MEG01 cells, IC50 = 17 μM. 18257513
A431 Function assay Inhibitory effect on phospho-Src (Tyr416) after EGF (100 uM) stimulation of A431 cells (38), IC50 = 22 μM. 15109642
K562 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human K562 cells, IC50 = 25 μM. 18257513
A431 Antiproliferative assay Tested for antiproliferative activity against human A431 cells, IC50 = 32 μM. 15109642
A431 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against A431 cells, IC50 = 32.2 μM. 16509573
KU812 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human KU812 cells, IC50 = 45 μM. 18257513
A431 Function assay 10 uM Inhibition of Src autophosphorylation of Y419 in A431 cells at 10 uM 16509573
8701-BC Proapoptotic assay 10 uM Proapoptotic activity against 8701-BC cells at 10 uM by PARP assay 16509573
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 301.77 Formula

C15H16ClN5

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 172889-27-9 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi AG 1879,AGL 1879 Smiles CC(C)(C)N1C2=NC=NC(=C2C(=N1)C3=CC=C(C=C3)Cl)N

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 9 mg/mL (29.82 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 4 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
LCK
(Cell-free assay)
4 nM
Fyn
(Cell-free assay)
5 nM
In vitro

PP2 inhibits Src by binding to an area of the molecule that does not overlap with the ATP binding domain. This compound (20 μM) induces 40-50% growth inhibition of HT29 cells, this concentration reduces the Src activity as early as 1 hour and maintains a 35% inhibition of Src activity for 2 days. It (100 mM) decreases the Src activity of HT29 cells in a dose-dependent manner. This chemical (1 mM-100 mM) causes a dose-dependent growth inhibition of human colon cancer cells (HT29, SW480, and PMCO1), liver cancer cells (PLC/PRF/5, KYN-2, Li7, and HepG2), and breast cancer cells (MCF-7, MDA-MB-468, and BT-474). It (20 μM) significantly increases aggregation in most of the cancer cells (HT29, SW480, PMCO1, PLC/PRF/5, KYN-2, Li7, MCF-7, and MDA-MB-468) in E-cadherin dependent manner. This compound (20 μM) enhances E-cadherin expression and also strongly increases E-cadherin’s association with the actin cytoskeleton in cancer cells. It (20 μM) increases the expression of α-catenin, β-catenin, and γ-catenin in HT29 cells, whereas in PLC/PRF/5 and MCF-7 cells, the total protein level of α-catenin does not change, but the levels of β- catenin and γ-catenin increases slightly. This inhibitor inhibits proliferation of two cervical cancer cells (HeLa and SiHa) in a time- and dose-dependent manner. It (10 μM) down-regulates pSrc-Y416, pEGFR-Y845, and -Y1173 expression levels in HeLa and SiHa cells. This chemical (10 μM) could modulate cell cycle arrest by up-regulating p21(Cip1) and p27(Kip1) in both HeLa and SiHa cells and down-regulating expression of cyclin A, and cyclin dependent kinase-2, -4 (Cdk-2, -4) in HeLa and of cyclin B and Cdk-2 in SiHa.

Saggio chinasico
Saggi enzimatici a complesso immune
L'enolasi trattata con acido viene diluita 1:20 con 1× PBS prima di essere aliquotata a 100 μL/pozzetto in una piastra di saggio Nunc a 96 pozzetti ad alto legame proteico. I pozzetti del saggio vengono quindi aspirati; bloccati con 0,5% di siero bovino, 1× PBS per 1 ora a 37 ℃; e quindi lavati cinque volte con 300 μL di 1× PBS/pozzetto. La fonte di Lck è costituita da cellule LSTRA o da Lck espressa in cellule HeLa utilizzando un sistema di espressione del vaccino. FynT è espressa in cellule HeLa utilizzando il sistema del vaccino. Le cellule (12,5×106/mL) vengono lisate in tampone di lisi, e i lisati vengono chiarificati per centrifugazione a 14.000 cpm per 15 minuti a 4 ℃ in una provetta Eppendorf. I lisati chiarificati vengono quindi incubati con l'anticorpo anti-chinasi appropriato a 10 μg/mL per 2 ore a 4 ℃. Perle di Proteina A-Sepharose vengono aggiunte alla miscela anticorpo/lisato a 250 μL/mL e lasciate incubare per 30 minuti a 4 ℃. Le perle vengono quindi lavate due volte in 1 mL di tampone di lisi e due volte in 1 mL di tampone chinasi (25 mM HEPES, 3 mM MnCl2, 5 mM MgCl2 e 100 μM ortovanadato di sodio) e risospese al 50% (p/v) in tampone chinasi. Venticinque microlitri della sospensione di perle vengono aggiunti a ciascun pozzetto della piastra a 96 pozzetti ad alto legame proteico rivestita di enolasi insieme a una concentrazione appropriata di questo composto e [γ-32P]ATP (25 μL/pozzetto di una soluzione di 200 μCi/mL in tampone chinasi). Dopo incubazione per 20 minuti a 20 ℃, 60 μL di tampone di solubilizzazione 2× bollente contenente 10 mM ATP vengono aggiunti ai pozzetti del saggio per terminare le reazioni. Trenta microlitri dei campioni vengono rimossi dai pozzetti, bolliti per 5 minuti e caricati su un gel di SDS-poliacrilammide al 7,5%. I gel vengono successivamente essiccati ed esposti a pellicola Kodak X-AR. Per la quantificazione, i film vengono scansionati utilizzando uno scanner laser Molecular Dynamics, e viene determinata la densità ottica della banda principale del substrato, enolasi p46. In esperimenti complementari per misurare l'attività di questa sostanza chimica contro Lck, la piastra di saggio viene lavata con due cicli di lavaggio su un raccoglitore Skatron utilizzando 50 mM EDTA, 1 mM ATP. Il fluido di scintillazione (100 μL) viene quindi aggiunto ai pozzetti, e l'incorporazione di 32P viene misurata utilizzando un micro-β-contatore.
In vivo

PP2 (5 mg/kg/day) induces some slowing in the growth rate of the primary tumors relative to the control treated with vehicle in SCID mice inoculated HT29 cells in the spleen. This compound induces some slowing in the growth rate of the primary tumors relative to the control treated with vehicle in SCID mice inoculated HT29 cells in the spleen. This chemical significantly reduces the relative liver weight and liver metastasis volume compared with the controls in SCID mice inoculated HT29 cells in the spleen. This compound (1.5 mg/kg i.p.) treated rats show approximately 50% reduction of infarct size on T2-weighted MRI and in TTC staining compared with controls in rats with focal ischemic brain injury. This chemical results in better the neurological score than controls in rats with focal ischemic brain injury.

Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21052789/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15285775/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot p-PI3K / PI3K / p-AKT / AKT / Bcl-2 / Caspase-3 p-Src / Src / p-MAPK / MAPK
S7008-WB1
30250573
Immunofluorescence β-catenin FAK / p-FAK
S7008-IF1
18566211

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT03842371 Unknown status
Sepsis Syndrome
West China Hospital
 February 11 2019 --
NCT02407626 Terminated
Myocardial Ischemia
Triemli Hospital|University of Alberta
 September 2015 Not Applicable
NCT02315287 Unknown status
Type 2 Diabetes
Seoul National University Bundang Hospital
 September 2014 Phase 4

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
Could you please suggest me the in vivo details about the dilution to reduce the amount of DMSO to 1 to 5% for it?

Risposta:
For in vivo study, we recommend to use 4% DMSO +Corn oil up to 2.5 mg/ml for it.