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JNK-IN-8 JNK Inibitore

N. Cat.S4901

JNK-IN-8 (JNK Inhibitor XVI) è il primo inibitore irreversibile di JNK per JNK1, JNK2 e JNK3 con IC50 di 4,7 nM, 18,7 nM e 1 nM, una selettività >10 volte superiore contro MNK2, Fms e nessuna inibizione di c-Kit, Met, PDGFRβ nella linea cellulare A375.
JNK-IN-8 JNK Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 507.59

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.16%
99.16

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
human HeLa cells Function assay 1 h Inhibition of JNK3-mediated c-jun phosphorylation in human HeLa cells after 1 hr incubation, IC50=0.486 μM 25415535
human A375 cells Function assay 1 h Inhibition of JNK3-mediated c-jun phosphorylation in human A375 cells after 1 hr incubation, IC50=0.338 μM 25415535
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 507.59 Formula

C29H29N7O2

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 1410880-22-6 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi JNK Inhibitor XVI Smiles CC1=C(C=CC(=C1)NC(=O)C2=CC(=CC=C2)NC(=O)C=CCN(C)C)NC3=NC=CC(=N3)C4=CN=CC=C4

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 100 mg/mL (197.0 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Caratteristiche
JNK-IN-8 and JNK-IN-7 are structurally very similar, but whereas the former is a specific covalent inhibitor of JNKs.
Targets/IC50/Ki
JNK3
(A375 cells)
1 nM
JNK1
(A375 cells)
4.7 nM
JNK2
(A375 cells)
18.7 nM
Kit (V559D,T670I)
(A375 cells)
56 nM
Kit (V559D)
(A375 cells)
92 nM
In vitro

JNK-IN-8 inibisce la fosforilazione di c-Jun nelle cellule HeLa e A375 con EC50 di 486 nM e 338 nM, rispettivamente. Questo composto mostra un drammatico miglioramento nella selettività ed ha eliminato il legame a IRAK1, PIK3C3, PIP4K2C e PIP5K3. Richiede Cys116 per l'inibizione di JNK2.

Questa sostanza chimica (10 mM) sopprime la fosforilazione di c-Jun stimolata da IL-1β nelle cellule IL-1R, un substrato consolidato delle JNK. Si lega covalentemente alle isoforme di JNK, causando un leggero ritardo nella mobilità elettroforetica delle isoforme di JNK.

È stato scoperto che inibisce la chinasi JNK mediante il profiling di selettività chinasica a largo spettro di una libreria di inibitori chinasici di acrilamide basati sulla struttura, utilizzando l'approccio KinomeScan. Questo composto possiede una regioselettività distinta delle sottostrutture 1,4-dianilina e 1,3-acido aminobenzoico. Adotta una conformazione di legame di tipo I a forma di L per accedere a Cys 154, situata verso il bordo del sito di legame dell'ATP.

Saggio chinasico
Saggio di cinetica di legame
Saggio di cinetica di legame Le cellule A375 vengono pretrattate con 1 μM di JNK-IN-8 per i tempi indicati. Rimuovere il mezzo e lavare tre volte con PBS. Risospendere il pellet cellulare con 1 mL di tampone di lisi (1% NP-40, 1% CHAPS, 25 mM Tris, 150 mM NaCl, cocktail di inibitori di fosfatasi e cocktail di inibitori di proteasi). Ruotare da un'estremità all'altra per 30 min a 4℃. I lisati vengono chiarificati mediante centrifugazione a 1,4×104 rpm per 15 min nell'Eppendorf. I lisati chiarificati vengono filtrati su gel in tampone di chinasi (0,1% NP-40, 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, cocktail di inibitori di fosfatasi, cocktail di inibitori di proteasi) utilizzando colonne 10DG. La concentrazione proteica totale del lisato filtrato su gel dovrebbe essere di circa 5–15 mg/ml. Il lisato cellulare viene etichettato con la sonda di ActivX a 5 μM per 1 ora. I campioni vengono ridotti con DTT e le cisteine vengono bloccate con iodoacetammide e filtrate su gel per rimuovere i reagenti in eccesso e scambiare il tampone. Aggiungere 1 volume di tampone di legame 2× (2% Triton-100, 1% NP-40, 2 mM EDTA, 2× PBS) e 50 μL di sospensione di microsfere di streptavidina, e ruotare da un'estremità all'altra per 2 ore, centrifugare a 7.000 rpm per 2 min. Lavare tre volte con tampone di legame 1× e tre volte con PBS. Aggiungere 30 μL di tampone campione 1× alle microsfere; riscaldare i campioni a 95℃ per 10 min. Eseguire i campioni su un gel SDS-PAGE a 110V. Dopo il trasferimento, la membrana viene immunoblottata con anticorpo JNK.
In vivo

JNK-IN-8 è un potente inibitore di JNK che mira specificamente all'attivazione di JNK. Ha attività antifungina.
Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28112734/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot c-Jun / p-c-Jun / ATF2 / p-ATF2 / Elk-1 / pElk-1 Notch1 / c-Myc / Cyclin D1 / p21
S4901-WB1
27941886
Growth inhibition assay Cell viability
S4901-viability1
25847947