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RAD001 (Everolimus) mTOR Inibitore

N. Cat.S1120

Everolimus è un inibitore di mTOR di FKBP12 con IC50 di 1,6-2,4 nM in un saggio senza cellule. Everolimus induce l'apoptosi e l'autofagia cellulare e inibisce la proliferazione delle cellule tumorali.
RAD001 (Everolimus) mTOR Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 958.22

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.78%
99.78

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
SQ20B Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=5.5 μM 24445311
Colo205 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=20 μM 24445311
ColoR Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=8.7 μM 24445311
HCT116 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=12 μM 24445311
HT29 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=15 μM 24445311
CAKI1 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=14 μM 24445311
SK-HEP1 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=12 μM 24445311
DU145 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=8 μM 24445311
OVCAR3 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=16 μM 24445311
HOP62 Cytotoxic Assay 72 h DMSO IC50=19 μM 24445311
Colo205 Function Assay 24 h DMSO Inhibits mTORC1 in human COLO205 cells assessed as reduction of S6 phosphorylation at 0.1 to 8 uM 24836070
Colo205 Function Assay 24 h DMSO Inhibits mTORC1 in human COLO205 cells assessed as reduction of 4-EBP1 phosphorylation at 0.1 to 8 uM 24836070
SK-HEP1 Function Assay 24 h DMSO Inhibits mTORC1 in human SK-HEP1 cells assessed as reduction of S6 phosphorylation at 0.1 to 8 uM 24836070
SK-HEP1 Function Assay 24 h DMSO Inhibits mTORC1 in human SK-HEP1 cells assessed as reduction of 4-EBP1 phosphorylation at 0.1 to 8 uM 24836070
Sf9 Function Assay 15 to 20 mins Inhibition of human BSEP overexpressed in Sf9 cell membrane vesicles assessed as uptake of [3H]-taurocholate in presence of ATP measured after 15 to 20 mins by membrane vesicle transport assay, IC50 = 2 μM. 23956101
Sf9 Function Assay 20 mins Inhibition of human MRP2 overexpressed in Sf9 cell membrane vesicles assessed as uptake of [3H]-estradiol-17beta-D-glucuronide in presence of ATP and GSH measured after 20 mins by membrane vesicle transport assay, IC50 = 11.3 μM. 23956101
A549 Autophagy assay 5 uM 6 h Induction of autophagy in human A549 cells assessed as increase in conversion of LC3-1 to LC3-2 at 5 uM after 6 hrs by Western blot analysis 26176165
A549 Function Assay 5 uM 3 to 24 h Inhibition of mTOR phosphorylation at ser2448 in human A549 cells at 5 uM after 3 to 24 hrs by Western blot analysis 26176165
A549 Function Assay 5 uM 3 to 24 h Inhibition of mTOR in human A549 cells assessed as downregulation of p70S6K phosphorylation at thr389 at 5 uM after 3 to 24 hrs by Western blot analysis 26176165
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 958.22 Formula

C53H83NO14

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 159351-69-6 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi RAD001,SDZ-RAD Smiles CC1CCC2CC(C(=CC=CC=CC(CC(C(=O)C(C(C(=CC(C(=O)CC(OC(=O)C3CCCCN3C(=O)C(=O)C1(O2)O)C(C)CC4CCC(C(C4)OC)OCCO)C)C)O)OC)C)C)C)OC

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 100 mg/mL (104.36 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
FKBP12
(Cell-free assay)
1.6-2.4 nM
mTOR (FKBP12)
(Cell-free assay)
1.6 nM-2.4 nM
In vitro
Everolimus mostra un'attività immunosoppressiva paragonabile a quella della rapamicina. Questo composto compete con FK 506 immobilizzato per il legame con FKBP12 biotinilata e mostra l'effetto inibitorio su una MLR bidirezionale eseguita con cellule spleniche di topi BALB/c e CBA con IC50 di 0,12-1,8 nM. Mostra anche effetti antiangiogenici/vascolari nella proliferazione di HUVEC indotta da VEGF con IC50 di 0,12 nM e nella proliferazione di HUVEC indotta da bFGF con IC50 di 0,8 nM, rispettivamente. Uno studio recente mostra che questa sostanza chimica presenta effetti inibitori dose-dipendenti sia sulle cellule totali che sulle cellule staminali della linea cellulare BT474 e sulle cellule primarie di cancro al seno con IC50 di 156 nM nelle cellule totali delle cellule primarie di cancro al seno e di 71 nM nelle cellule totali delle cellule BT474. Inoltre, il trattamento combinato con questo composto e trastuzumab produce un'inibizione significativamente aumentata della crescita delle cellule staminali tumorali con un tasso di inibizione aumentato di oltre il 50 %.
Saggio chinasico
Saggio di legame FKBP12 e reazione linfocitaria mista (MLR)
Saggio di legame FKBP12: Il legame alla proteina di legame FK 506 (FKBP12) è indirettamente valutato mediante un saggio di competizione di tipo ELISA. FK 506 è incluso in ogni singolo esperimento come standard e l'attività inibitoria è espressa come IC50 relativa rispetto a FK 506 (rIC50 = IC50 di questo composto/IC50 FK 506). Reazione linfocitaria mista (MLR): Le attività immunosoppressive di RAP e dei suoi derivati sono valutate in una MLR bidirezionale, utilizzando cellule spleniche di topi BALB/c e CBA. RAP è incluso in ogni singolo esperimento come standard e l'attività inibitoria è espressa come IC50 relativa rispetto a RAP (rIC50 = IC50 di questo composto/IC50 RAP).
In vivo
Everolimus (da 0,1 a 10 mg/kg) inibisce in modo dose-dipendente la crescita delle metastasi primarie (orecchio) e dei linfonodi del melanoma B16/BL6, con una diminuzione del numero totale di vasi e una riduzione dei vasi maturi. In un modello animale di xenotrapianto di cellule staminali BT474, questo composto mostra significative riduzioni delle dimensioni medie del tumore (590,6 mm3), rispetto al gruppo di controllo con una dimensione del tumore di 698 mm3. Inoltre, il trattamento combinato con questo composto e trastuzumab diminuisce significativamente la dimensione del tumore del xenotrapianto (410,8 mm3) più del trattamento con questo composto da solo.
Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16033851/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18708754/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot Mcl-1 / p-ERK / S6K1(T389) pS6RP cleaved caspase-3
S1120-WB3
27351224
Growth inhibition assay Cell counts IC50 Cell proliferation
S1120-viability1
27127803
Immunofluorescence TERT
S1120-IF1
27127803

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT05843253 Not yet recruiting
High Grade Glioma|Diffuse Intrinsic Pontine Glioma|Anaplastic Astrocytoma|Glioblastoma|Glioblastoma Multiforme|Diffuse Midline Glioma H3 K27M-Mutant|Metastatic Brain Tumor|WHO Grade III Glioma|WHO Grade IV Glioma
Nationwide Children''s Hospital|Novartis
 May 30 2024 Phase 2
NCT05501769 Active not recruiting
Breast Cancer
Arvinas Estrogen Receptor Inc.|Pfizer|Arvinas Inc.
 September 8 2022 Phase 1
NCT05476939 Recruiting
Diffuse Intrinsic Pontine Glioma|Diffuse Midline Glioma H3 K27M-Mutant
Gustave Roussy Cancer Campus Grand Paris|Chimerix|Innovative Therapies For Children with Cancer Consortium
 September 29 2022 Phase 3
NCT05293964 Recruiting
Breast Cancer
Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co. Ltd.
 May 18 2022 Phase 1

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
For the in vivo work, I know it needs to be dissolved in 30% propylene glycol (dilution in water) and 5% Tween 80. Would the final solution be a clear liquid or a turbid suspension?

Risposta:
Our S1120 in 30% Propylene glycol+5% Tween 80+ddH2O at 5mg/ml is a clear solution. And for oral gavage, there is another common vehicle, 1% CMC Na. It can be dissolved in it at 30mg/ml as a suspension.