Home Immunology & Inflammation ROS Attivatore Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate

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Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate attivatore di ROS

N. Cat.S7873

Il disodio (R)-2-idrossiglutarato (acido D-α-idrossiglutarico disodico) è un inibitore competitivo delle diossigenasi dipendenti dall'α-chetoglutarato con un Ki di 10,87 ± 1,85 mM.
Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS Attivatore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 192.08

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.74%
99.74

Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 192.08 Formula

C5H6Na2O5

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 103404-90-6 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi D-α-Hydroxyglutaric acid disodium Smiles C(CC(=O)[O-])C(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+]

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

Water : 38 mg/mL

DMSO : Insoluble
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
α-ketoglutarate-dependent dioxygenase
In vitro
Nelle cellule U-87MG, il (R)-2-idrossiglutarato agisce come un debole antagonista dell'α-KG per inibire le istone demetilasi dipendenti dall'α-KG e aumenta la dimetilazione sia su H3K9 che su H3K79. Inoltre, il (R)-2-idrossiglutarato inibisce l'ATP sintasi e la segnalazione mTOR, causando così l'arresto della crescita e l'uccisione delle cellule tumorali.
Saggio chinasico
Saggi enzimatici
Per saggiare l'attività demetilasica umana JHDM1A/KDM2A verso H3K36me2, la JHDM1A marcata con His viene prima ottenuta trasformando pET28a-JHDM1A in Escherichia coli BL21 e l'espressione proteica viene indotta mediante l'aggiunta di 1 mM IPTG a 30 °C quando la densità cellulare raggiunge 0,5 unità OD600. Le cellule vengono lisate mediante sonicazione e agarosio Ni-NTA viene utilizzato per purificare le proteine di fusione His-JHDM1A. Il saggio di demetilazione istonica viene eseguito incubando 2 μg di oligonucleosomi, 4 μg di His-JHDM1A purificata e/o 10–50 mM di L- o D-2-HG in tampone di demetilazione istonica [50 mM HEPES (pH 8,0), 625 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 0,1–0,5 mM α-KG, 2 mM ascorbato] a 37 °C per 2–3 ore e le reazioni vengono interrotte dall'aggiunta di tampone di caricamento SDS e successivamente analizzate mediante western blotting utilizzando un anticorpo anti-H3K36me2. Per misurare l'attività demetilasica di CeKDM7A verso H3K9me2 e H3K27me2, vengono utilizzati come substrati due peptidi dimetilati sintetici H3K9me2 [ARTKQTARK (me2)STGGKA] e H3K27me2 [QLATKAARK (me2)SAPAS]. I saggi di demetilazione vengono eseguiti in presenza di 10 μg di enzima, 1 μg di peptide in 20 μl di tampone 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 50 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 100 μM α-KG, 2 mM Vc, 10 mM PMSF per 3 ore. La miscela di reazione di demetilazione viene desalata facendola passare attraverso una C18 ZipTip. Per esaminare l'effetto inibitorio di 2-HG, varie concentrazioni di 2-HG vengono incubate brevemente con KDM7A prima di aggiungere altre miscele di reazione. I campioni vengono analizzati mediante uno spettrometro di massa MALDI-TOF/TOF.
Riferimenti