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Bafilomycin A1 (Baf-A1) inibitore di V-ATPase

N. Cat.S1413

Bafilomycin A1 (Baf-A1) è un inibitore della H+-ATPase vacuolare con IC50 di 0,44 nM, ed è stato riscontrato che inibisce l'autophagy mentre induce l'apoptosis.
Bafilomycin A1 (Baf-A1) Proton Pump Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 622.83

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: >97%
97

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Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
human H4 cells Function assay 0.4 μM 24 h Induction of light chain 3-GFP level in human H4 cells at 0.4 uM after 24 hrs by high throughput fluorescence microscopy relative to control 18024584
RAW 264.7 cells Function assay 100 nM Antimicrobial activity against Salmonella enterica Typhimurium 14028 infected in RAW 264.7 cells assessed as increased nitric oxide production in infected cells at 100 nM 19307359
mouse RAW264.7 cells Apoptosis assay 100 nM 16 h Induction of apoptosis in mouse RAW264.7 cells assessed as late apoptotic cells at 100 nM after 16 hrs using annexin V-propidium iodide staining by flow cytometry 19307359
human HeLa cells Function assay 400 nM Induction of autophagy in human HeLa cells expressing EGFP-LC3 assessed as increase in LC3-2 level at 400 nM 18391949
human MCF7 cells Function assay 4 h Inhibition of rapamycin-induced autophagy in human MCF7 cells expressing EGFP-LC3 assessed as decrease in EGFP levels at 100 nM after 4 hrs by Western blotting relative to control 20028134
RAW 264.7 cells Bactericidal activity assay 100 nM 16 h Bactericidal activity against Salmonella enterica Typhimurium 14028 infected in RAW 264.7 cells assessed as decrease in bacterial growth yield at 100 nM after 16 hrs postinfection by flow cytometry in presence of 10 ug/ml of intracellular replication inhi 19307359
RAW 264.7 cells Antimicrobial activity assay 100 nM Antimicrobial activity against Salmonella enterica Typhimurium 14028 infected in RAW 264.7 cells assessed as increased nitric oxide production in infected cells at 100 nM 19307359
RAW 264.7 cells Antimicrobial activity assay 100 nM 30 mins Antimicrobial activity against Salmonella enterica Typhimurium 14028 infected in RAW 264.7 cells assessed as inhibition of bacterial replication at 100 nM treated 30 mins before infection measured after 2 to 16 hrs postinfection by flow cytometry 19307359
rat 3Y1 cells Function assay Induction of morphological changes in rat 3Y1 cells assessed as elongation of cells 29701963
human Huh7.5.1 cells Antiviral activity 3 h Antiviral activity against HCV genotype 2a JFH-1 in human Huh7.5.1 cells assessed as reduction of viral entry up to 3 hrs by luciferase assay 26396683
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 622.83 Formula

C35H58O9

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 88899-55-2 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles CC1CC(=CC=CC(C(OC(=O)C(=CC(=CC(C1O)C)C)OC)C(C)C(C(C)C2(CC(C(C(O2)C(C)C)C)O)O)O)OC)C

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
H+-ATPase
(Cell-free assay)
0.44 nM
In vitro
Bafilomycin A1 (Baf-A1) è un antibiotico macrolide tossico derivato da Streptomyces griseus, che inibisce la corrente di cortocircuito indotta dall'epitelio del mantello esterno (OME). L'IC50 e la dose massima di inibizione di questo composto sono rispettivamente 0,17 μM e 0,5 μM. Inoltre, inibisce l'influsso acido con un valore di IC50 di 0,4 nM. Inibisce anche l'acidificazione in modo dose-dipendente, con conseguente minore spegnimento e quindi maggiore fluorescenza. Questo composto previene la vacuolizzazione delle cellule Hela indotta da H. pylori, con una concentrazione inibitoria che dà il 50% del massimo (ID50) di 4 nM, ed è molto efficace nel ripristinare le cellule vacuolate ad un aspetto normale. Colpisce anche il trasporto del materiale endocitato dai compartimenti endocitici precoci a quelli tardivi, non solo dissipando il basso pH endosomiale ma anche bloccando il trasporto dagli endosomi precoci a quelli tardivi nelle cellule HeLa. A dosi di 0,1-1 μM, inibisce completamente l'acidificazione dei lisosomi rivelata dall'incubazione con arancio di acridina nelle cellule BNL CL.2 e A431. Quando aggiunto alla soluzione salina bilanciata di Hanks, la degradazione delle proteine endogene è fortemente inibita e numerosi autofagosomi si accumulano nelle cellule H-4-II-E. Previene anche la comparsa di HRP endocitata nei vacuoli autofagici.
Saggio chinasico
Saggi di attività enzimatica dell'ATPase
Il terreno del saggio enzimatico dell'ATPase contiene 6 mM di MgSO4, 50 mM di HEPES (pH 7.4), 200 mM di Na2SO3 (attivatore della V-ATPase), 0.5 mM di orto-vanadato di sodio (inibitore della P-ATPase), 0.5 mM di azide di sodio (inibitore della F-ATPase) e 3 mM di Na2ATP. Questo terreno (1.0 mL), con o senza l'aggiunta dell'inibitore della V-ATPase Bafilomycin A1 (Baf-A1), viene incubato con l'omogenato filtrato (0.1 mL) per 60 minuti a 23–25 °C. La reazione viene arrestata con l'aggiunta di 1 mL di TCA al 3%. I bianchi spettrometrici sono preparati come per il saggio enzimatico, con l'eccezione che il campione di tessuto viene aggiunto dopo l'acido. L'analisi del fosfato viene eseguita aggiungendo 2 mL di 1-butanolo e 0.2 mL di soluzione di molibdato (5 g di molibdato di ammonio, 22 mL di H2SO4 a 100 mL). Dopo aver vorticato per 15 secondi, la soluzione viene neutralizzata con 0.5 mL di soluzione di citrato (100 g/500 mL, pH 7.0) e nuovamente vorticata per 15 secondi. La soluzione viene quindi centrifugata (2000 × g; 3 minuti) per separare la fase butanolica e l'assorbanza di questa fase viene letta a 400 nm. Vengono preparati standard di ortofosfato (0.1 μM–2.0 μM) e trattati allo stesso modo dei saggi di attività enzimatica. L'attività enzimatica è espressa in μmol di ortofosfato liberato per ora e per milligrammo di proteina. L'attività V-ATPase è considerata la differenza tra l'attività ATPasi totale misurata in presenza di Na2SO3, ortovanadato di sodio e azide di sodio e l'attività ATPasi misurata in presenza di questi reagenti e di questo composto.
In vivo
Bafilomycin A1 (Baf-A1) (1 μM e 0,1 μM) inibisce completamente l'attività di riassorbimento degli osteoclasti in coltura. Questo composto inibisce in modo dose-dipendente il tasso di assorbimento di Na+ in giovani tilapia con un Ki di 0,16 μM.
Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8446034/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9811698/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/1832676/
  • [7] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9639028/
  • [8] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/7817803/
  • [9] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10574743/
  • [10] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14713959/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot Ret / EGFR / p75 NGFR
S1413-WB1
21559479
Growth inhibition assay Cell viability
S1413-viability1
20534000
Immunofluorescence AIF LC3
S1413-IF1
25512644
ELISA TNF-alpha
S1413-ELISA1
26240140

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
How to dissolve it？

Risposta:
S1413 is soluble in DMSO at 6 mg/ml. Please do not use alcohols as solvent, because this compound will degrade in alcohols.