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VX-809 (Lumacaftor) CFTR modulator

N. Cat.: S1565

Lumacaftor (VX-809, VRT 826809) acts to correct CFTR mutations common in cystic fibrosis by increasing mutant CFTR (F508del-CFTR) maturation,EC50 of 0.1 μM in fisher rat thyroid cells. Phase 3.
VX-809 (Lumacaftor) CFTR modulator Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 452.41

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.87%
99.87

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
CFBE41o Corrector assay 24 hrs Corrector activity at CFTR F508-del mutant (unknown origin) expressed in human CFBE41o cells harboring HS-YFP preincubated for 24 hrs followed by forskolin/genistein stimulation for 30 mins by fluorescence assay, EC50 = 2.5704 μM. 29272749
FRT Corrector assay 25 mins Corrector activity at human CFTR F508 deletion mutant expressed in FRT cells incubated for 25 mins with forskolin by YFP-based fluorescence analysis relative to control, EC50 = 2.6 μM. 26561003
TC32 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for TC32 cells 29435139
U-2 OS qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for U-2 OS cells 29435139
A673 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells 29435139
DAOY qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for DAOY cells 29435139
Saos-2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells 29435139
BT-37 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells 29435139
RD qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for RD cells 29435139
SK-N-SH qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-SH cells 29435139
BT-12 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-12 cells 29435139
MG 63 (6-TG R) qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for MG 63 (6-TG R) cells 29435139
NB1643 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB1643 cells 29435139
BT-12 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for BT-12 cells 29435139
OHS-50 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for OHS-50 cells 29435139
fibroblast cells qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for control Hh wild type fibroblast cells 29435139
Rh41 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh41 cells 29435139
Rh30 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh30 cells 29435139
U-2 OS qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for U-2 OS cells 29435139
Rh41 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh41 cells 29435139
RD qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for RD cells 29435139
SJ-GBM2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells 29435139
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells 29435139
NB-EBc1 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells 29435139
LAN-5 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for LAN-5 cells 29435139
Rh18 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh18 cells 29435139
CFBE41o Corrector assay 1 uM 24 hrs Corrector activity at CFTR F508-del mutant (unknown origin) expressed in human CFBE41o cells harboring HS-YFP assessed as increase in matured protein levels at cell surface at 1 uM after 24 hrs by electrophoretic mobility assay 29272749
HBE Corrector assay Corrector activity at CFTR F508del/F508del mutant in primary HBE cells assessed as increase in chloride ion current across apical membrane measured 18 to 24 hrs post compound treatment on basolateral side of cells in presence of channel potentiator GLPG18 29251932
CFBE41o Corrector assay Corrector activity at CFTR F508del mutant (unknown origin) expressed in human CFBE41o cells assessed as increase in fully glycosylated protein by western blot analysis 26041577
CFBE41o Corrector assay 1 uM 24 hrs Corrector activity at CFTR F508del mutant (unknown origin) expressed in human CFBE41o cells assessed as increase in size of cAMP-dependent current at 1 uM after 24 hrs measured at +100 mV by whole cell patch clamp assay 26041577
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 452.41 Formula

C24H18F2N2O5

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 936727-05-8 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi VRT 826809 Smiles CC1=C(N=C(C=C1)NC(=O)C2(CC2)C3=CC4=C(C=C3)OC(O4)(F)F)C5=CC(=CC=C5)C(=O)O

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 90 mg/mL (198.93 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 13 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Caratteristiche
Higher specificity and efficacy relative to other CFTR defect drugs.
Targets/IC50/Ki
F508del-CFTR
(Fisher rat thyroid cells)
0.1 μM(EC50)
In vitro

Lumacaftor (VX-809) agisce a livello del RE per permettere a una frazione del F508del-CFTR di adottare una forma correttamente ripiegata, di uscire dal RE e di mobilizzarsi verso la superficie cellulare per un normale funzionamento. Nelle cellule tiroidee di ratto Fischer (FRT) che esprimono F508del-CFTR, il trattamento con questo composto migliora significativamente la maturazione del F508del-CFTR di 7,1 volte con una EC50 di 0,1 μM, e potenzia il trasporto di cloruro mediato dal F508del-CFTR di circa 5 volte con una EC50 di 0,5 μM, mentre VRT-768 ha valori di EC50 più elevati di 7,9 μM e 16 μM, rispettivamente. Nelle cellule HEK-293 che esprimono F508del-CFTR, esso (3 μM) aumenta l'uscita del F508del-CFTR dal RE di 6 volte, raggiungendo livelli paragonabili al 34% del CFTR. Nelle cellule epiteliali bronchiali umane primarie (HBE) con mutazione F508del-CFTR, l'agente aumenta la maturazione del CFTR e potenzia la secrezione di cloruro con EC50 di 350 nM e 81 nM, rispettivamente, più efficace di Corr-4a e VRT-325. Il F508del-CFTR corretto da esso mostra una probabilità di apertura di singolo canale di 0,39 simile al CFTR normale di 0,40. A differenza di VX-770, non è un potenziatore del CFTR, poiché un'aggiunta acuta non ha alcun effetto sulla funzione del F508del-CFTR. Contrariamente a VRT-325 e Corr-4a, non migliora la lavorazione delle forme normali o mutanti di hERG o P-gp, così come altre proteine mislocalizzate che causano malattie, inclusi il mutante Z di α1-antitripsina (E342K-α1-AT) o la N370S-β-glucosidasi, suggerendo che è specifico per il CFTR. Esso in combinazione con VRT-325 o Corr-4a ha un effetto additivo sul trasporto di cloruro mediato dal CFTR in F508del-HBE coltivate.

Saggio chinasico
maturazione del F508del-CFTR
Le cellule FRT che esprimono stabilmente F508del-CFTR vengono trattate con concentrazioni crescenti di Lumacaftor (VX-809) per 48 ore. Dopo l'incubazione, le cellule vengono raccolte in soluzione D-PBS ghiacciata (senza calcio e magnesio) e centrifugate a 1.000 × g a 4 °C. I pellet cellulari vengono lisati in 1% Nonidet P-40, 0,5% desossicolato di sodio, 200 mM NaCl, 10 mM Tris, pH 7,8 e 1 mM EDTA più miscela di inibitori di proteasi (1:250) per 30 minuti su ghiaccio. I lisati vengono centrifugati per 10 minuti a 10.000 × g a 4 °C per pelletizzare i nuclei e il materiale insolubile. Circa 12 μg di proteine totali vengono riscaldate in tampone di Laemmli con 5% β-mercaptoetanolo a 37 °C per 5 minuti e caricate su un gel Tris-acetato dal 3% all'8%. Il gel viene trasferito su nitrocellulosa e processato per Western blotting utilizzando un anticorpo monoclonale CFTR o policlonale per GAPDH. I blot vengono sviluppati mediante chemiluminescenza potenziata. La quantificazione delle quantità relative delle bande C e GAPDH viene eseguita utilizzando l'analisi NIH ImageJ dei film scansionati.
In vivo

Lumacaftor (VX-809; VRT 826809) è un modulatore del CFTR che corregge il ripiegamento e il traffico della proteina CFTR.
Riferimenti

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Immunofluorescence CFTR / USP13 Cell surface kAE1 / kAE1
S1565-IF1
30618756

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT03512119 Completed
Cystic Fibrosis Homozygous for Phe 508 Del CFTR|Glucose Intolerance or Newly Diagnosis Diabetes
University Hospital Strasbourg France
 February 11 2016 --
NCT02589236 Completed
Cystic Fibrosis
Nivalis Therapeutics Inc.|Medidata Solutions
 November 2015 Phase 2
NCT02514473 Completed
Cystic Fibrosis
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
 July 2015 Phase 3
NCT01899105 Completed
Cystic Fibrosis
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
 July 2013 Phase 1