Triciribine (API-2) Akt inhibitor

Triciribine (API-2) mostra la massima inibizione della crescita intorno a 1-10 μM e inibisce la fosforilazione di Akt, così come della p70S6K a valle, a livelli basali a 100 μM (IC50 = 130 nM). Mostra una particolare promessa per l'inibizione della crescita nelle cellule di astrocitoma mutanti Nf1 e Trp53 in modo dipendente dal grado. La linea WHO II K1861-10 è inibita, in modo incompleto (69% di inibizione massima), con un valore di GI50 di 1,7 μM per questo composto, mentre le linee tumorali di grado superiore (KR158, KR130 e SF295) sono inibite in misura maggiore (>80% di inibizione massima) a valori di GI50 inferiori (0,4-1,1 mM). È importante sottolineare che è molto meno efficace nell'inibire gli astrociti primari (GI50 13,6 mM), suggerendo che questo inibitore possa mostrare specificità per le cellule tumorali. [1] Inibisce HIV-1 con un IC50 di 20 nM. Un'inibizione superiore al 90% si ottiene a 0,1 μM e l'inibizione completa della formazione di sincizi si ottiene a 5 μM. La tossicità cellulare associata nella stessa linea cellulare per Triciribine è di 46 μM, con conseguenti indici di selettività di 2250. Inibisce marcatamente la produzione dell'antigene core p24 indotta da HIV-1, la trascrittasi inversa e la produzione di virus infettivo in modo dose-dipendente utilizzando cellule CEM-SS, H9 acutamente infettate da HIV-1 e cellule H9III _B e U1 persistentemente infettate. [2] Questo composto inibisce la fosforilazione di Akt a Thr308 e Ser473 e l'attività di Akt nella linea cellulare di carcinoma prostatico umano PC-3. Sensibilizza le cellule PC-3 all'apoptosi indotta da TRAIL e anti-CD95, mentre le cellule rimangono resistenti ai chemioterapici che danneggiano il DNA. [3] È altamente selettivo per Akt e non inibisce l'attivazione della fosfatidilinositolo 3-chinasi, della fosfoinositide-dipendente chinasi-1, della proteina chinasi C, della chinasi siero e glucocorticoidi-inducibile, della proteina chinasi A, del trasduttore di segnale e attivatore della trascrizione 3, della chinasi extracellulare regolata dal segnale-1/2 o della c-Jun NH2-terminal chinasi. [4]

Saggio delle modifiche della fosforilazione di Akt

Le cellule vengono coltivate fino all'80%-90% di confluenza e stimolate per 5-10 minuti con 1-10 ng/mL di fattore di crescita epidermico o fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF)–AA con o senza 10-20 mM di U0126 o LY-294002. I lisati proteici (5-20 μg) vengono separati mediante SDS-PAGE al 12%-15% e analizzati mediante Western blot per gli anticorpi Akt, Akt fosforilato (fosfo-Ser 473), MAPK e MAPK fosforilato (p44/42 fosfo-Thr202/Tyr204) (1:1000).

Triciribine (API-2), somministrata a 1 mg/kg/die i.p., inibisce la crescita tumorale del 90%, 88% e 80% in topi nudi portatori di tumori OVCAR3, OVCAR8 e PANC1, rispettivamente, che sovraesprimono Akt. Tuttavia, questo composto ha scarso effetto sulla crescita delle cellule OVCAR5 e COLO357. [4]