Home Protein Tyrosine Kinase EGFR inhibitor Pelitinib (EKB-569)

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Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibitor

N. Cat.: S1392

Pelitinib (EKB-569) is a potent irreversible EGFR inhibitor with IC50 of 38.5 nM. This compound also slightly inhibits Src, MEK/ERK and ErbB2 with IC50s of 282 nM, 800 nM and 1255 nM, respectively. Phase2.
Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibitor Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 467.92

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.49%
99.49

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
A431 Function assay Inhibition of EGFR autophosphorylation in human A431 cells, IC50=0.00802μM. 20797871
Sf9 Function assay 10 mins Inhibition of recombinant human His6-tagged EGFR cytoplasmic domain (645 to 1186 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in autophosphorylation preincubated for 10 mins followed by ATP-MgCl2 addition and measured, IC50=0.0385μM. 30600149
A431 Function assay 90 mins Inhibition of EGFR in human A431 cells assessed as reduction in EGF-stimulated EGFR autophosphorylation preincuabted for 90 mins followed by EGF-stimulation by sandwich-ELISA, IC50=0.039μM. 30973735
DiFi Function assay 2 hrs Inhibition autophosphorylation of EGFR in human DiFi cells after 2 hrs by ELISA, IC50=0.07943μM. 17689836
UCH1 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH1 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=0.09μM. 30973735
UCH2 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH2 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=1.6μM. 30973735
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 467.92 Formula

C24H23ClFN5O2

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 257933-82-7 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CC(=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)C#N)NC(=O)C=CCN(C)C

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 13 mg/mL (27.78 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Caratteristiche
An improved version of EKI-785.
Targets/IC50/Ki
EGFR
38.5 nM
Src
282 nM
MEK/ERK
800 nM
ErbB2
1.255 μM
Raf
3.353 μM
In vitro
Pelitinib (EKB-569) mostra un'attività inibitoria molto più elevata contro EGFR, rispetto al c-erbB-2 strettamente correlato, così come altre chinasi come Src, Cdk4, c-Met, Raf e MEK/ERK, con IC50 che vanno da 282 nM per Src a >20 μM per Cdk4. Coerentemente, il trattamento con questo composto inibisce significativamente l'autofosforilazione di EGFR ma non di c-Met nelle cellule A431. Inibisce potentemente la proliferazione dei cheratinociti umani normali (NHEK), così come delle cellule tumorali A431 e MDA-468 con IC50 di 61 nM, 125 nM e 260 nM, rispettivamente, mentre mostra poca attività contro le cellule MCF-7 con IC50 di 3,6 μM. Questa sostanza chimica inibisce la fosforilazione di EGFR indotta da EGF nelle cellule A431 e NHEK con IC50 di 20-80 nM, così come la fosforilazione di STAT3 con IC50 di 30-70 nM. A 75-500 nM, inibisce anche specificamente l'attivazione di AKT ed ERK1/2, senza influenzare la via NF-κB. Nelle cellule NHEK, questo composto inibisce anche potentemente l'attivazione di EGFR mediata da TGF-α con IC50 di 56 nM, così come l'attivazione di STAT3 ed ERK1/2 con IC50 rispettive di 60 nM e 62 nM.
Saggio chinasico
Autofosforilazione di EGFR nelle cellule
Per gli esperimenti che utilizzano cellule in coltura, le cellule A431 vengono trattate con varie concentrazioni di Pelitinib (EKB-569) per 2,75 ore prima della co-incubazione con 100 ng/mL di EGF per 0,25 ore. Le cellule vengono lavate due volte con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) fredda prima di aggiungerle al tampone di lisi (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM acido etilendiamminotetraacetico (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% desossicolato di sodio, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatina A, 10 mg/mL leupeptina, 20 KIU/mL aprotinina, 2 mM ortovanadato di sodio e 100 mM fluoruro di sodio) per 20 minuti su ghiaccio, prima dell'immunoprecipitazione e dell'immunoblotting SDS-PAGE. Per l'immunoprecipitazione, le cellule coltivate vengono poste in tampone di lisi freddo e immediatamente omogeneizzate su ghiaccio con un Polytron con diversi impulsi. L'omogenato viene prima centrifugato a 2500 rpm (20 minuti, 4 °C) e poi di nuovo a 14.000 rpm in una microcentrifuga (10 minuti, 4 °C). I surnatanti (1000 μg di proteina) vengono incubati per 2 ore a 4 °C con 15 mL di anticorpo policlonale anti-EGFR. Dopo 2 ore, vengono aggiunti 50 μL di perle di agarosio di proteina G plus/proteina A e incubate con rotazione costante per 2 ore a 4 °C. Dopo il lavaggio con tampone di lisi, le perle vengono bollite per 2 minuti nel tampone campione di Laemmli. Le proteine vengono quindi risolte mediante SDS-PAGE, trasferite su membrana di immobilon e sondate durante la notte con un anticorpo anti-fosfotirosina coniugato con perossidasi di rafano (HRP). Le membrane vengono sviluppate utilizzando il reagente ECL. La proteina EGFR totale viene determinata spogliando le membrane e ri-sondando con anticorpi specifici del recettore. La quantificazione delle bande viene eseguita mediante densitometria, utilizzando il software ImageQuant con uno scanner a trasmittanza laser Molecular Dynamics.
In vivo
Una singola dose orale di 10 mg/kg di Pelitinib (EKB-569) inibisce potentemente la fosforilazione di EGFR negli xenotrapianti A431 con EGFR sovraespresso, del 90% entro 1 ora e di >50% dopo 24 ore. L'amministrazione di questo composto a 20 mg/kg/die inibisce la tumorigenesi nei topi APCMin/+ dell'87%, equivalente all'effetto di 2 dosi di EKI-785 (40 mg/kg/die), coerentemente con una maggiore potenza in vivo. Questa sostanza chimica inibisce selettivamente la segnalazione di EGFR nelle cellule epiteliali delle vie aeree in vivo. Nel modello murino di rimodellamento epiteliale delle vie aeree che è inducibile da infezione virale e presenta un passaggio ritardato ma permanente alla metaplasia delle cellule caliciformi, il trattamento con questo composto a 20 mg/kg/die corregge tutti e 3 gli aspetti del rimodellamento epiteliale, bloccando completamente l'aumento delle cellule ciliate e la diminuzione delle cellule di Clara, e inibendo significativamente la metaplasia delle cellule caliciformi.
Riferimenti