PIK-93 PI4K Inibitore

A novel and potent inhibitor of both PI3Kγ and PI4KIIIβ.

PIK-93 inhibits PI3Kγ and PI4KIIIβ, with IC50 values of 16 nM and 19 nM, respectively. This compound also inhibits other members of PI3Ks, including PI3Kα, β, and δ, with IC50 values of 39 nM, 0.59 μM, and 0.12 μM, respectively. It shows no obvious inhibitory effect against a panel of other kinases, even at a concentration of 10 μM. [1] In differentiated HL60 (dHL60) cells, this compound (0.5 μM–1 μM) impairs consolidation and stability of the leading edge formed after treatment with uniform f-Met-Leu-Phe (fMLP). It alters the localization, but not the amount, of the fMLP-dependent accumulation of total F-actin. In fMLP gradients, this chemical reduces the chemotactic index and triples the cells' turning frequency. [2] In COS-7 cells, this compound (250 nM) effectively abrogates the accumulation of CERT-PH domain and FL-Cer in Golgi. It of the same concentration also significantly inhibits the conversion of [³H]serine-labeled endogenous ceramide to sphingomyelin. These facts indicate a key role of PI4KIIIβ in ceramide transport between the ER and Golgi, as well as in the regulation of spingomyelin synthesis. [3] In T6.11 cells, this compound (300 nM) reduces carbachol-induced translocation of TRPC6 to the plasma membrane and net Ca²⁺ entry. [4] A recent report shows that this chemical has anti-enterovirus effects, as revealed by its inhibition of both poliovirus (PV) and hepatitis C virus (HCV) replication, with EC50 values of 0.14 µM and 1.9 µM, respectively. [5]

Dosaggio delle PI3K

I valori di IC50 sono misurati utilizzando un saggio TLC standard per l'attività della lipide chinasi. Le reazioni delle chinasi vengono eseguite preparando una miscela di reazione contenente chinasi, PIK-93 (concentrazione finale del 2% di DMSO), tampone (25 mM HEPES, pH 7,4, 10 mM di MgCl₂) e fosfatidilinositolo appena sonicato (100 µg/ml). Le reazioni vengono avviate mediante l'aggiunta di ATP contenente 10 µCi di γ-³²P-ATP fino a una concentrazione finale di 10 o 100 µM, e lasciate procedere per 20 minuti a temperatura ambiente. Per l'analisi TLC, le reazioni vengono quindi terminate mediante l'aggiunta di 105 µL di HCl 1N seguito da 160 µL di CHCl₃:MeOH (1:1). La miscela bifasica viene vortexata, brevemente centrifugata e la fase organica trasferita in una nuova provetta utilizzando un puntale per pipetta da gel pre-rivestito con CHCl₃. Questo estratto viene depositato su piastre TLC e sviluppato per 3–4 ore in una soluzione 65:35 di n-propanolo:acido acetico 1M. Le piastre TLC vengono quindi essiccate, esposte a uno schermo per fosforimaging e quantificate. L'attività chinasica viene tipicamente misurata a 10–12 concentrazioni di questo composto, rappresentando diluizioni a metà dalla concentrazione più alta di 100 μM.