PHA-793887 CDK Inibitore

Multi-CDK inhibitor.

PHA-793887 has low activity against CDK1, CDK4, CDK9 and GSK3β with IC50 of 60 nM, 62 nM, 138 nM and 79 nM, respectively. This compound inhibits cell proliferation of many tumor cell lines, including A2780, HCT-116, COLO-205, C-433, DU-145, A375, PC3, MCF-7, and BX-PC3, with IC50 of 88 nM–3.4 μM. It (1 μM) shows a decrease in the S phase, a subsequent increase of the G1 phase and a slight accumulation of G2/M phase in A2780 cells. This chemical (3 μM) significantly increases G2/M phase and reduces DNA synthsis. [1] It is cytotoxic for leukemic cell lines, including K562, KU812, KCL22, and TOM1, with IC50 of 0.3–7 μM, but it is not cytotoxic for normal unstimulated peripheral blood mononuclear cells or CD34+ hematopoietic stem cells. In colony assays, this compound shows very high activity against leukemia cell lines with IC50 less than 0.1 μM. It induces cell-cycle arrest, inhibits Rb and nucleophosmin phosphorylation, and modulates cyclin E and cdc6 expression at 0.2−1 μM and induces apoptosis at 5 μM. [2]

Saggio della chinasi CDK

L'attività biochimica dei composti è determinata mediante incubazione con enzimi e substrati specifici, seguita dalla quantificazione del prodotto fosforilato. PHA-793887 (1,5 nM–10 μM) viene incubato per 30-90 min a temperatura ambiente in presenza di una miscela di ATP/³³P-γ-ATP, substrato e l'enzima specifico (0,7-100 nM) in un volume finale di 30 μL di tampone chinasico, utilizzando piastre da 96 pozzetti a fondo a U. Dopo l'incubazione, la reazione viene interrotta e il substrato fosforilato viene separato dall'ATP radioattivo non incorporato utilizzando biglie SPA, resina Dowex o un filtro in fosfocellulosa Multiscreen come segue: (1) Per i saggi SPA. La reazione viene interrotta mediante l'aggiunta di 100 μL di PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 μM ATP, contenente 1 mg di biglie SPA rivestite di streptavidina. Dopo 20 min di incubazione per la cattura del substrato, 100 μL della miscela di reazione vengono trasferiti in piastre Optiplate da 96 pozzetti contenenti 100 μL di CsCl 5 M, lasciati riposare per 4 ore per consentire la stratificazione delle biglie sulla parte superiore della piastra e contati utilizzando TopCount per misurare il fosfato incorporato nel substrato. (2) Per il saggio su resina Dowex. Viene aggiunta una quantità di 150 μL di resina/formiato, pH 3,00, per interrompere la reazione e catturare l'³³P-γ-ATP non reagito, separandolo dal substrato fosforilato in soluzione. Dopo 60 min di riposo, 50 μL di supernatante vengono trasferiti in piastre Optiplate da 96 pozzetti. Dopo l'aggiunta di 150 μL di Microscint 40, la radioattività viene contata nel TopCount. (3) Per il saggio Multiscreen. La reazione viene interrotta con l'aggiunta di 10 μL di EDTA (150 mM). Una quantità di 100 μL viene trasferita su una piastra MultiScreen per consentire il legame del substrato al filtro in fosfocellulosa. Le piastre vengono quindi lavate tre volte con 100 μL di H₂PO₄ (75 mM) filtrato tramite un sistema di filtrazione MultiScreen ed essiccate. Dopo l'aggiunta di 100 μL di Microscint 0, la radioattività viene contata nel TopCount. I valori di IC50 sono ottenuti mediante analisi di regressione non lineare.

PHA-793887 (10–30 mg/kg) shows good efficacy in the human ovarian A2780, colon HCT-116, and pancreatic BX-PC3 carcinoma xenograft models. [1] This compound (20 mg/kg) is effective in xenograft models of K562 and HL60 cells, primary leukemic disseminated model, and a high-burden disseminated ALL-2 model derived from a relapsed Philadelphia-positive acute lymphoid leukemia patient. [2]