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H-89 Dihydrochloride PKA Inibitore

N. Cat.: S1582

L'H-89 Dihydrochloride è un potente inibitore della PKA con Ki di 48 nM in un saggio senza cellule, 10 volte più selettivo per PKA rispetto a PKG, e 500 volte maggiore selettività rispetto a PKC, MLCK, calmodulina chinasi II e caseina chinasi I/II. L'H-89 Dihydrochloride induce l'autophagy.
H-89 Dihydrochloride PKA Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 519.28

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.48%
99.48

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
CHO  Growth Inhibition Assay 10 μM 1 h inhibits 5-HT induced cAMP production decrease 12569069
SK-N-MC Function Assay 30 μM 24 h DMSO reduces the down-regulation of β1-AR by isoproterenol by 50%  11705454
Sf9 Function assay Inhibition of His-tagged human MSK1 expressed in Sf9 cells, IC50 = 0.12 μM. 10998351
Sf9 Function assay Inhibition of rat ROCK2 expressed in Sf9 cells, IC50 = 0.27 μM. 10998351
SF9 Function assay Inhibition of human PKBalpha expressed in SF9 cells, IC50 = 2.6 μM. 10998351
OVCAR8 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human OVCAR8 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 10.5 μM. 24508830
OVCAR8 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human OVCAR8 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 10.5 μM. 24389511
HL60 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human HL60 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 11.4 μM. 24389511
PC3M Function assay Inhibition of GSK3-beta in human PC3M cells by ELISA, IC50 = 15 μM. 18345609
U87MG Growth inhibition assay Growth inhibition of human U87MG cells by SRB assay, IC50 = 15 μM. 18345609
U87MG Antiproliferative assay 96 hrs Antiproliferative activity against human U87MG cells after 96 hrs by SRB assay, IC50 = 15 μM. 20151677
HCT116 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human HCT116 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 15.7 μM. 24508830
HCT116 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human HCT116 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 15.7 μM. 24389511
PC3M Function assay 96 hrs Inhibition of PC3M cells by SRB assay after 96 hrs, GI50 = 18 μM. 17451235
PC3M Growth inhibition assay Growth inhibition of human PC3M cells by SRB assay, IC50 = 18 μM. 18345609
LS174T Function assay 20 uM 6 hrs Inhibition of PGE2-stimulated TCF/LEF transactivation in human LS174T cells at 20 uM measured after 6 hrs by dual luciferase reporter gene assay 27736063
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 519.28 Formula

C20H20BrN3O2S.2HCl

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 130964-39-5 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles C1=CC2=C(C=CN=C2)C(=C1)S(=O)(=O)NCCNCC=CC3=CC=C(C=C3)Br.Cl.Cl

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 100 mg/mL (192.57 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : 10 mg/mL (超声加热十分钟，60℃)

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
PKA
(Cell-free assay)
48 nM(Ki)
S6K1
(Cell-free assay)
80 nM
PKG
(Cell-free assay)
0.48 μM(Ki)
In vitro

H89 2HCl is a potent PKA (cAMP-dependent) protein kinase A inhibitor with Ki of 48 nM, exhibits 10-fold selectivity over PKG, exhibits >500-fold selectivity over PKC, MLCK, calmodulin kinase II and casein kinase I/II. Pretreatment of the cells with this compound (30 μM) 1 h before the addition of forskolin markedly inhibits the forskolin-induced protein phosphorylation in a dose-dependent manner. This compound also inhibits several other kinases with IC50 of 80, 120, 135, 270, 2600 and 2800 nM for S6K1, MSK1, PKA, ROCKII, PKBα and MAPKAP-K1b, respectively. It also has activity at some cellular receptors and ion channels, including Kv1.3 K+ channels,β1AR and β2AR.

Saggio chinasico
attività enzimatica della PKA
L'attività della proteina chinasi cAMP-dipendente viene analizzata in una miscela di reazione contenente, in un volume finale di 0,2 mL, 50 mM Tris-HCl (pH 7,0), 10 mM di acetato di magnesio, 2 mM di EGTA, 1 μM di cAMP o assenza di cAMP, 3,3-20 μM di [γ-32P]ATP (4 × 105 cpm), 0,5 μg dell'enzima, 100 μg di istone H2B e ogni composto, come indicato.
In vivo

H89 causes distinct modifications of protein phosphorylation, with the most robust changes in phosphorylation are fructose-1,6-biphosphatase, heterogeneous nuclear ribonucleoprotein (hnRNP), NSFL1 cofactor p47, all which have potentially regulatory connections to cAMP/PKA.

Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18523239/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16687476/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot p-eNOS / T-eNOS / p-PKA p-GPIbβ / GPIbβ / p-BAD p-S6K1 / p-rpS6 / p-GSK3β
S1582-WB2
31035633
Immunofluorescence p-eNOS / eNOS iNOS / NFκB p65 myopodin
S1582-IF3
30513637

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2020-10-08)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT03712423 COMPLETED
Solid Tumor
Amsterdam UMC, location VUmc
 2018-04-01 PHASE1