CP-724714 HER2 Inibitore

CP-724,714 is marked selectively against EGFR with IC50 of 6.4 μM. CP-724,714 is >1,000-fold less potent for IR, IGF-1R, PDGFRβ, VGFR2, abl. Src, c-Met c-jun NH2-terminal kinase (JNK)-2, JNK-3, ZAP-70, cyclin-dependent kinase (CDK)-2, and CDK-5. CP-724,714 potently reduces the EGF-induced autophosphorylation of the chimera containing the erbB2 kinase domain with IC50 of 32 nM, but is markedly less potent against EGFR in transfected NIH3T3 cells. CP-724,714 sensitively inhibits the proliferation of erbB2-amplified cells including BT-474 and SKBR3, with IC50 of 0.25 and 0.95 μM. CP-724,714 induces the accumulation of cells in G1 phase and a marked reduction in S-phase in BT-474 cells at 1 μM. [1] CP-724,714 likely exerts its hepatotoxicity via both hepatocellular injury and hepatobiliary cholestatic mechanisms. CP-724,714 displays inhibition of cholyl-lysyl and taurocholate (TC) efflux into canaliculi in cryopreserved and fresh cultured human hepatocytes, respectively. CP-724,714 inhibits TC transport in membrane vesicles expressing human bile salt export pump with IC50 of 16 μM and inhibits the major efflux transporter in bile canaliculi, MDR1, with IC50 of ~28 μM. [2]

Saggi chinasici

I domini intracellulari ricombinanti di erbB2 (residui amminoacidici 675-1255) ed EGFR (residui amminoacidici 668-1211) sono espressi in cellule Sf9 infettate da baculovirus come proteine di fusione S-transferasi. Le proteine vengono purificate mediante cromatografia di affinità su perle di Sepharose per l'uso nel saggio. Le piastre Nunc MaxiSorp a 96 pozzetti sono rivestite incubando una notte a 37 °C con 100 μL/pozzetto di 0,25 mg/mL di poli(Glu:Tyr, 4:1), PGT in PBS. L'eccesso di PGT viene rimosso per aspirazione e la piastra viene lavata 3 volte con tampone di lavaggio (0,1% Tween 20 in PBS). La reazione chinasica viene eseguita in 50 μL di 50 mM HEPES (pH 7,4) contenente 125 mM di cloruro di sodio, 0,1 mM di ortovanadato di sodio, 1 mM di ATP e ~15 ng di proteina ricombinante. Vengono aggiunti inibitori in DMSO; la concentrazione finale di DMSO è del 2,5%. La fosforilazione viene avviata con l'aggiunta di ATP e prosegue per 6 minuti a temperatura ambiente, con agitazione costante. La reazione chinasica viene terminata aspirando la miscela di reazione e lavando quattro volte con tampone di lavaggio. Il PGT fosforilato viene misurato dopo un'incubazione di 25 minuti con 50 μL/pozzetto di anticorpo anti-fosfotirosina PY54 coniugato con HRP, diluito a 0,2 μg/mL in tampone di blocco (3% BSA, 0,05% Tween 20 in PBS). L'anticorpo viene rimosso per aspirazione e la piastra viene lavata quattro volte con tampone di lavaggio. Il segnale colorimetrico viene sviluppato con l'aggiunta di 50 μL/pozzetto di substrato perossidasi per micropiastre Tetrametilbenzidina e interrotto con l'aggiunta di 50 μL/pozzetto di acido solforico 0,09 M. Il prodotto di fosfotirosina formato viene stimato misurando l'assorbanza a 450 nm. Il segnale per i controlli è tipicamente A0,6–1,2, con essenzialmente nessun background nei pozzetti senza ATP, proteina chinasica o PGT, ed è proporzionale al tempo di incubazione per 6 minuti.

CP-724,714 (25 mg/kg) is rapidly absorbed after p.o. administration and causes reduction of tumor erbB2 receptor phosphorylation after dosing in FRE-erbB2 or BT-474 xenografts. CP-724,714 induces apoptosis in FRE-erbB2 xenograft–bearing (s.c.) mice and shows 50% tumor growth inhibition at 50 mg/kg, without weight loss or mortality. CP-724,714 also has great antitumor activity in MDA-MB-453, MDA-MB-231, LoVo (colon), and Colo-205 (colon) xenografts. Furthermore, CP-724,714 (30 or 100 mg/kg) reduces the extracellular signal–regulated kinase and Akt phosphorylation in BT-474 xenografts. [1]