E7080 (Lenvatinib)

E7080, als een potente remmer van in vitro angiogenese, vertoont een significant remmend effect op VEGF/KDR en SCF/Kit signalering. Volgens de in vitro receptor tyrosine en serine/threonine kinase assays, remt deze verbinding Flt-1, KDR, Flt-4 met IC50 van respectievelijk 22, 4.0 en 5.2 nM. Naast deze kinasen remt deze verbinding ook FGFR1 en PDGFR Protein Tyrosine Kinases met een IC50-waarde van respectievelijk 46, 51 en 100 nM voor FGFR1, PDGFR en PDGFR . [1] Deze verbinding remt potent de fosforylering van VEGFR2 (IC50, 0.83 nM) en VEGFR3 (IC50, 0.36 nM) in HUVEC's die gestimuleerd worden door respectievelijk VEGF en VEGF-C. [2] Een recente studie toont aan dat de behandeling met deze verbinding (zowel bij 1 M als 10 M) resulteert in een significante remming van celmigratie en -invasie door de remming van FGFR en PDGFR signalering. [3]

Oraal toegediend in een H146-xenograftmodel, remt Lenvatinib (E7080) de groei van H146-tumoren bij 30 en 100 mg/kg op een dosisafhankelijke manier en leidt het tot tumorregressie bij 100 mg/kg. Bovendien verlaagt deze verbinding bij 100 mg/kg de microvassendichtheid meer dan anti-VEGF antilichaam en imatinibbehandeling. [1] Het remt significant de lokale tumorgroei in een MDA-MB-231 mammatvetpad (m.f.p.) model met RTV's (berekend tumorvolume op dag 8/tumorvolume op dag 1) van 0.81, en vermindert zowel angiogenese als lymfangiogenese van gevestigde metastatische knobbeltjes van MDA-MB-231 tumor in de lymfeklieren. [2]

• In vitro kinase assay [1]

  Tyrosine kinase assays worden uitgevoerd door HTRF (KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met, EGFR) en ELISA (PDGFR ), met gebruik van de recombinante kinasedomeinen van receptoren. In beide assays worden 4 L seriële verdunningen van deze verbinding gemengd in een 96-well ronde plaat met 10 L enzym, 16 L poly (GT) oplossing (250 ng) en 10 L ATP-oplossing (1 M ATP) (eindconcentratie DMSO is 0.1%). In wells voor blanco's wordt geen enzym toegevoegd. In controlewells wordt geen testartikel toegevoegd. De kinasereactie wordt geïnitieerd door ATP-oplossing toe te voegen aan elk well. Na 30 minuten incubatie bij 30°C wordt de reactie gestopt door 0.5 M EDTA (10 L/well) toe te voegen aan het reactiemengsel in elk well. Verduningsbuffer, geschikt voor elke kinase assay, wordt toegevoegd aan het reactiemengsel. In de HTRF-assay wordt 50 L van het reactiemengsel overgebracht naar een 96-well 1/2 area zwarte EIA/RIA plaat, HTRF-oplossing (50 L/well) wordt toegevoegd aan het reactiemengsel, en vervolgens wordt de kinase-activiteit bepaald door meting van fluorescentie met een tijdopgeloste fluorescentiedetector bij een excitatiegolflengte van 337 nm en emissiegolflengten van 620 en 665 nm. In de ELISA wordt 50 L van het reactiemengsel geïncubeerd in avidine-gecoate 96-well polystyreenplaten bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten. Na wassen met wasbuffer wordt PY20-HRP-oplossing (70 L/well) toegevoegd en het reactiemengsel wordt geïncubeerd bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten. Na wassen met wasbuffer wordt TMB-reagens (100 L/well) toegevoegd aan elk well. Na enkele minuten (10 30 minuten) wordt 1 M H PO (100 L/well) toegevoegd aan elk well. Kinase-activiteit wordt bepaald door meting van absorptie bij 450 nm met een microplaatlezer.

• Cellijnen

  HUVECs

• Concentraties

  0-10 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  HUVECs (1,000 cells in each well in serum-free medium containing 2% fetal bovine serum) and L6 rat skeletal muscle myoblasts (5,000 cells in each well in serum-free DMEM) are dispensed in a 96-well plate and incubated overnight. This compound and either VEGF (20 ng/mL) or FGF-2 (20 ng/mL) containing 2% fetal bovine serum and PDGFβ (40 ng/mL) are added to each well. Cells are incubated for 3 days and then the ratios of surviving cells are measured by WST-1 reagent. For proliferation assay, samples are duplicated and three separate experiments are done.

• Dierlijke modellen

  H146 tumor cells are implanted subcutaneously (s.c.) into the flank region of female BALB/c nude mice.

• Doseringen

  ≤100 mg/kg

• Toediening

  Administered via p.o.