SGI-1027

SGI-1027 inhibe la méthylation de l'ADN en inhibant directement les DNMT, et entraîne une dégradation sélective de la DNMT1 dans une grande variété de lignées de cellules cancéreuses humaines. Ce composé présente un effet cytotoxique minimal ou nul sur les cellules d'hépatome de rat H4IIE. [1]

Ce produit chimique (0-100 μM) présente un effet pro-apoptotique modéré sur la lignée cellulaire de leucémie humaine U937 sans changements pertinents sur le cycle cellulaire. [2]

SGI-1027 (DNA Methyltransferase Inhibitor II) est un inhibiteur de la DNMT .

• Essai de la DNA methyltransferase (CpG methyltransferase)

  L'activité de la DNA méthylase est évaluée en mesurant l'incorporation du groupe ³H₁-méthyle de l'Ado-Met dans l'ADN à l'aide d'un essai de liaison sur filtre échangeur d'ions DE-81 avec quelques modifications. La DNMT1 humaine recombinante, la Dnmt3a/Dnmt3b de souris recombinante (500 ng) sont incubées avec 500 ng de poly(dI-dC) ou d'ADN duplex hémiméthylé et 75 ou 150 nM (0,275 μCi ou 0,55 μCi) de [méthyl-³H]-S-adénosylméthionine (Ado-Met) dans un volume total de 50 μl à 37°C pendant 1 heure. ou M. Sss I est analysé dans le tampon du fournisseur. Chaque réaction est effectuée en double et comprend des contrôles sans inhibiteur ou sans ADN. La réaction est arrêtée en trempant le mélange réactionnel sur un disque de filtre échangeur d'ions Whatman DE-81, lavé (cinq fois, 10 min chacun, avec un tampon Na-phosphate 0,5 M; pH 7,0) séché et compté dans un compteur à scintillation. La radioactivité de fond (contrôle sans ADN) est soustraite des valeurs obtenues avec les mélanges réactionnels contenant de l'ADN et la radioactivité obtenue dans la réaction sans aucun inhibiteur est considérée comme 100% d'activité. L'IC50 est déterminée par interpolation à partir du graphique du pourcentage d'activité en fonction de la concentration de l'inhibiteur. Pour déterminer la nature de l'inhibition de l'activité de la DNMTase par ce composé, l'activité enzymatique de la DNMT1 est mesurée en présence d'une concentration fixe de ce produit chimique (0, 2,5, 5 et 10 μM) tandis que l'un des deux (Ado-Met ou ADN) était varié dans un mélange réactionnel particulier. À une concentration fixe d'ADN (500 ng), les concentrations variables d'Ado-Met utilisées sont de 25 à 500 nM, respectivement. De même, les concentrations finales d'ADN sont variées de (25 à 500 ng) à 75 nM d'Ado-Met.

• Lignées cellulaires

  Rat hepatoma H4IIE cells

• Concentrations

  ~300 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  Rat hepatoma H4IIE cells are used as the test system. These cells are grown in DMEM supplemented with fetal bovine serum (10%) and calf serum (10%). Cells are seeded into 96-well plates and after 48 h exposed to SGI-1027 at concentrations ranging from 0 to 300 µmol/L. The solubility is determined by Nephalometry techniques immediately after dosing and before harvesting the cells at 24 h. Following the exposure period, the cells or their supernatant (culture medium) are analyzed for changes in cell proliferation (propidium iodide), membrane leakage (α-GST), mitochondrial function [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide and cellular ATP], oxidative stress (intracellular GSH and 8-isoprostane), and apoptosis. The half-maximal toxic concentration (TC50) is determined from the dose-response curves.

• Modèles animaux

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosages

  11.2 mg/kg

• Administration

  i.p.