RS-127445

DL50 : Souris 391,4 mg/kg (i.v.) ; Rats 370,1 mg/kg (i.v.) ; Lapins 142,3 mg/kg (i.v.) [4]

• Liaison du radioligand

  La sélectivité de RS-127445 pour les récepteurs 5-HT2B est examinée en testant l'affinité de ce composé pour plus de 100 sites de liaison de canaux ioniques ou de récepteurs supplémentaires. Les cellules CHO-K1 exprimant les récepteurs 5-HT2A, 5-HT2B ou 5-HT2C humains sont récoltées en utilisant 2 mM d'EDTA dans une solution saline tamponnée au phosphate. Les membranes cellulaires sont préparées par quatre cycles d'homogénéisation et de centrifugation (48 000×g pendant 15 min). Chaque dosage est établi de manière à atteindre des conditions d'état stable et à optimiser la liaison spécifique. Pour le récepteur 5-HT2A, les membranes de 1×10⁶ cellules sont incubées avec 0,2 nM de [³ H]-kétansérine à 32 °C pendant 60 min. La liaison non spécifique est déterminée en utilisant 10 μM de méthysergide. Pour le récepteur 5-HT2B, les membranes de 1,5×10⁶ cellules sont incubées avec 0,2 nM de [³ H]-5-HT à 48 °C pendant 120 min. La liaison non spécifique est déterminée en utilisant 10 μM de 5-HT. Pour le récepteur 5-HT2C, les membranes de 3×10⁵ cellules sont incubées avec 0,5 nM de [³ H]-mésulergine à 32 °C pendant 60 min. La liaison non spécifique est déterminée en utilisant 10 μM de méthysergide. Les dosages sont terminés par filtration sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GF/B) qui ont été prétraités avec 0,1 % de polyéthylèneimine. La radioactivité totale et liée est déterminée par comptage par scintillation liquide. Plus de 90 % de liaison spécifique est obtenue dans chacun de ces dosages.

• Lignées cellulaires

  HEK-293 cells expressing the human 5-HT2B receptor

• Concentrations

  10 μM

• Temps dincubation

  20 min

• Méthode

  RS-127445, vehicle or other antagonists are pre-incubated with 240 μl of HEK-293 cells expressing the human 5-HT2B receptor suspension at 37 °C for 20 min. HEK-293 cells are incubated with[3H]-myoinositol (1.67 μCi/ml) in 162 cm² flasks overnight at 37 °C in an inositol free Ham's F12 medium containing 10% dialyzed foetal bovine serum. The cells are harvested, washed five times with phosphate bufffered saline and resuspended in inositol free Ham's F12 media at density of approximately 3×10³ cells/ml. The reactions are initiated by addition of 5-HT. Sixty minutes later, the reactions are terminated by adding 50 μl of ice-cold 20% perchloric acid, chilled in an ice-water bath for 10 min and then neutralized with 160μl of 1 N KOH. Each sample is diluted with 2 ml of 50 mM Tris-HCl, pH 7.4 at room temperature. The aqueous portion (2.2 ml) is transferred onto Dowex AG1X8 columns (1 ml, 1 : 1, w/v) which has been washed with 5 ml of distilled water. The columns are then washed with 18 ml of distilled water and the inositol phosphates are eluted with 3 ml of 1 N HCl. The eluted radioactivity is determined by liquid scintillation spectroscopy using a Packard 1900CA analyzer. ^[1]

• Modèles animaux

  rats

• Dosages

  5 mg/kg

• Administration

  Oral for 2.5 h ,intraperitoneal and intravenousroutes for 0.08 h