Alvespimycin (17-DMAG) Hydrochloride

Le 17-DMAG présente une puissance environ 2 fois supérieure contre la Hsp90 humaine que le 17-AAG, avec un IC50 de 62 nM contre 119 nM. Dans les cellules SKBR3 et SKOV3 qui surexpriment la protéine cliente Hsp90 Her2, le 17-DMAG provoque une régulation à la baisse de Her2 avec un EC50 de 8 nM et 46 nM, respectivement, ainsi qu'une induction de Hsp70 avec un EC50 de 4 nM et 14 nM, respectivement, conduisant à une cytotoxicité significative avec un GI50 de 29 nM et 32 nM, respectivement, ce qui est cohérent avec l'inhibition de Hsp90. [1] Le 17-DMAG en association avec le vorinostat induit synergiquement l'apoptose des cellules MCL cultivées ainsi que des cellules MCL primaires, plus puissamment que chaque agent seul, en atténuant significativement les niveaux de cycline D1 et de CDK4, ainsi que de c-Myc, c-RAF et Akt. [3] Contrairement au 17-AAG qui n'est actif que pour l'IKKβ dans les cellules de leucémie lymphoïde chronique (LLC), le traitement au 17-DMAG entraîne efficacement l'épuisement de la protéine cliente Hsp90, ce qui réduit la liaison à l'ADN de NF-κB p50/p65, diminue la transcription des gènes cibles de NF-κB et provoque une apoptose dépendante des caspases. En ciblant la famille NF-κB, le 17-DMAG induit sélectivement une cytotoxicité dose- et temps-dépendante contre les cellules LLC, mais pas contre les lymphocytes T normaux ou les cellules NK importants pour la surveillance immunitaire. [5]

Un traitement au 17-DMAG à 5 mg/kg ou 25 mg/kg trois fois par semaine réduit significativement la croissance tumorale des xénogreffes de TMK-1, en réduisant significativement la zone vasculaire et le nombre de cellules tumorales proliférantes dans les coupes. [2] Conformément à l'inhibition de la signalisation FAK in vivo, le traitement au 17-DMAG à 25 mg/kg trois fois par semaine supprime significativement la croissance tumorale et la métastase des xénogreffes ME180 et SiHa chez la souris. [4] L'administration de 17-DMAG à 10 mg/kg pendant 16 jours diminue significativement le nombre de globules blancs et prolonge la survie dans un modèle murin de transplantation TCL1-SCID. [5]

• Essai de liaison par compétition basé sur la polarisation de fluorescence (FP)

  Cet essai utilise un analogue de geldanamycine marqué au difluorure de bore dipyrrométhène (BODIPY-AG) comme sonde et mesure la polarisation de fluorescence lors de la liaison de la sonde à une protéine. La protéine Hsp90 humaine native (isoformes \u03b1 + \u03b2) est isolée des cellules HeLa. La solution de BODIPY-AG est fraîchement préparée dans le tampon d'essai FP (20 mM HEPES-KOH, pH 7.3, 1.0 mM EDTA, 100 mM KCl, 5.0 mM MgCl₂, 0.01% NP-40, 0.1 mg/mL de \u03b3-globuline bovine fraîche (BGG), 1.0 mM de DTT frais, et un inhibiteur de protéase à partir d'une solution stock dans le DMSO. Les courbes de compétition sont obtenues en mélangeant 10 \u03bcL de chaque solution contenant BODIPY-AG et Hsp90, et une dilution en série de 17-DMAG fraîchement préparée dans le tampon d'essai FP à partir d'une solution stock dans le DMSO. Les concentrations finales sont de 10 nM BODIPY-AG, 40 ou 60 nM Hsp90, une concentration variable de 17-DMAG (0.10 nM-10 \u03bcM), et \u22640.25% de DMSO dans une microplaque à 384 puits. Après 3 heures d'incubation à 30 °C, l'anisotropie de fluorescence (\u03b3_Ex = 485 nm, \u03b3_Em = 535 nm) est mesurée sur un lecteur de microplaques multilabel EnVision 2100. La valeur IC50 de 17-DMAG est obtenue à partir des courbes de compétition.

• Lignées cellulaires

  Chronic lymphocytic leukemia (CLL)

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Temps dincubation

  24, or 48 hours

• Méthode

  Cells are exposed to various concentrations of 17-DMAG for 24, or 48 hours. For the assessment of cytotoxicity, MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 24 hours before spectrophotometric measurement. Apoptosis is determined by staining with annexin isothiocyanate and propidium iodide (PI).

• Modèles animaux

  SCID mice engrafted with TCL1 leukemia cells

• Dosages

  10 mg/kg

• Administration

  Intraperitoneal injection 5 times per week