BMS-777607

BMS-777607 est un inhibiteur sélectif de la kinase Met compétitif de l'ATP qui bloque puissamment l'autophosphorylation de c-Met avec un IC50 de 20 nM dans les lysats de cellules GTL-16, et démontre une inhibition sélective de la prolifération dans les lignées cellulaires tumorales dépendantes de Met, telles que la lignée cellulaire GTL-16, H1993 et U87. [1] Ce composé inhibe l'autophosphorylation de c-Met déclenchée par le facteur de croissance des hépatocytes (HGF) avec un IC50 de <1 nM dans les cellules cancéreuses de la prostate PC-3 et DU145. Ce composé a peu d'effet sur la croissance des cellules tumorales, mais présente un effet inhibiteur sur la dispersion cellulaire induite par le HGF dans les cellules PC-3 et DU145, avec une inhibition presque complète à 0,5 µM. Il supprime également la migration et l'invasion cellulaires stimulées de manière dose-dépendante (IC50 < 0,1 µM) dans les deux lignées cellulaires. [2] L'application de ce composé (~10 µM) aux cellules KHT murines hautement métastatiques pendant 2 heures élimine puissamment les niveaux basaux de c-Met autophosphorylé avec un IC50 de 10 nM sans affecter le c-Met total, entraînant une inhibition dose-dépendante de la phosphorylation des molécules de signalisation en aval, y compris ERK, Akt, p70S6K et S6. Le traitement avec ce composé (~1 µM) pendant 24 heures inhibe puissamment la dispersion, la motilité et l'invasion des cellules KHT à des doses dans la gamme nanomolaire, ce qui est cohérent avec le knockdown du gène MET, et affecte modestement la prolifération cellulaire et la formation de colonies. [3]

L'administration orale de BMS 777607 (6,25-50 mg/kg) réduit significativement les volumes tumoraux des xénogreffes tumorales humaines GTL-16 chez des souris athymiques sans toxicité observée. [1] L'administration de ce composé (25 mg/kg/jour) diminue le nombre de nodules tumoraux pulmonaires KHT (28,3 %), améliore l'hémorragie morphologique et altère significativement le phénotype métastatique chez les souris C3H/HeJ femelles âgées de 6 à 8 semaines injectées avec des cellules de fibrosarcome de rongeur KHT sans toxicité systémique apparente par rapport au traitement de contrôle. Une faible dose de ce produit chimique (10 mg/kg) offre également une inhibition légère mais non significative de la formation de nodules pulmonaires par rapport au contrôle du véhicule. [3]

• Analyse de la kinase Met

  La réaction de la kinase se compose de GST-Met exprimé par baculovirus, 3 μg de poly(Glu/Tyr), 0,12 μCi ³³P γ-ATP, 1 μM ATP dans 30 μL de tampon de kinase (20 mM Tris-Cl, 5 mM MnCl2, 0,1 mg/mL BSA, 0,5 mM DTT). Les réactions sont incubées pendant 1 heure à 30 °C et arrêtées par l'ajout d'acide trichloroacétique (TCA) froid à une concentration finale de 8 %. Les précipités de TCA sont collectés sur des plaques unifiltres GF/C à l'aide d'un moissonneur universel Filtermate, et les filtres sont quantifiés à l'aide d'un compteur à scintillation liquide TopCount à 96 puits. Des courbes dose-réponse sont générées pour déterminer la concentration requise pour inhiber 50 % de la phosphorylation du substrat (IC50). Ce composé est dissous à 10 mM dans du DMSO et évalué à 10 concentrations, en double.

• Lignées cellulaires

  Rodent fibrosarcoma KHT cells

• Concentrations

  Dissolved in DMSO as a stock solution (10 mM), final concentration ~10 μM.

• Temps dincubation

  2, 24 and 96 hours

• Méthode

  KHT cells are exposed to serial dilution of BMS 777607 for 96 hours, then the MTT assay and trypan blue exclusion are used for the determination of cell proliferation and cell death, respectively. KHT cell colonies are incubated with this compound for 24 hours and then stained with crystal violet (0.1%) and photographed for the assessment of cell scattering. 2 mm scratch on the confluent KHT cell monolayer is made using a sterilized 1 ml pipette tip followed by treated with this compound for 24 hours, then the number of cells that have migrated into the denuded area is counted on 4 random fields for the evaluation of cell migration. For the examination of cell invasion, the commercial transwell inserts (8 μm pore membrane) pre-loaded with Matrigel are incubated with serum-free medium in the presence or absence of this compound at 37 °C for 2 hours to allow rehydration of Matrigel. Then cells suspended in serum-free medium are loaded onto the top chamber (5 × 10³/insert) and complete medium (containing 10% FBS) is used in the lower chamber as a chemoattractant. After incubation for 24 hours, the Matrigel is removed and the inserts are stained with crystal violet. Invaded cells on the underside of the filter are photographed and counted.

• Modèles animaux

  Rodent fibrosarcoma KHT cells are established in female C3H/HeJ mice.

• Dosages

  10-25 mg/kg.

• Administration

  Oral gavage once daily.